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热休克蛋白22对缺氧/复氧损伤内皮细胞的保护作用及可能机制

鲍慧慧  程晓曙  陈琦  洪葵  
【摘要】：目的探讨HSP22对缺氧/复氧损伤内皮细胞中NF-κB转导通路的影响及其机制。方法实验分三组:未转染组,转染pEGFP-N1空质粒细胞组和pEGFP-N1/HSP22重组质粒细胞组,观察缺氧24小时复氧12小时内皮细胞,电泳迁移率(EMSA)检测NF-κB的表达;应用核浆分离技术和Western blot分析法检测NF-κBp65亚基在各组细胞核内的蛋白表达水平;应用Western blot分析法检测各组细胞NF-κB信号途径中,κB抑制因子-α(IκB-α)的降解以及IκB激酶IKKa的表达;免疫共沉淀检测HSP22在NF-κB激活通路里IκB-α和IKKa蛋白的关系。以HSP22抗体免疫共沉淀和Western blot法检测各组细胞中HSP22与IκB-α和IKKa蛋白的结合水平。结果EMSA分析法显示,pEGFP-N1/HSP22组核内NF-κB活性水平显著低于对照组和pEGFP-N1组(P0.05),应用核浆分离技术和Western blot分析各组NF-κB p65水平与EMSA结果一致。Western blot分析法检测各组细胞IκB-α、IKK-α,可见pEGFP-N1/HSP22组IκB-α表达水平显著升高,而IKK-α表达水平低于Control组和pEGFP-N1组(P0.05)。应用免疫共沉淀-Western blot法检测各组细胞HSP22与IκB-α和IKKa蛋白结合水平,可见HSP22与IKK-α抗体共免疫沉淀,在pEGFP-N1/HSP22组出现特异性条带,提示HSP22抑制NF-κB激活可能是通过它与IKK-α相互作用。结论在缺氧/复氧损伤内皮细胞中,HSP22可能通过影响IKK-α水平,升高细胞内IκB-α水平,抑制NF-κB的表达而对缺氧/复氧损伤内皮细胞发挥保护作用。

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