全反式维甲酸和反义寡核苷酸探针联合抑制口腔鳞癌端粒酶活性的研究

【摘要】：目的:大约90%的恶性肿瘤组织细胞具有端粒酶的活性。端粒酶是细胞内的一种逆转录酶,主要由hTR(RNA成分)和hTERT(催化亚基)构成。其中RNA成分hTR是反义寡核苷酸探针作用的理想位点;而最近研究提示全反式维甲酸可以有效的抑制端粒酶中催化亚基hTERT的表达。所以本研究的目的是探讨是否全反式维甲酸(ATRA)和反义核酸探针可以在体外联合抑制口腔鳞癌细胞的端粒酶的活性,从而探讨其临床应用的潜在价值。方法:采用oligofectamin将反义核酸探针(As-ODN-hTR)转染人舌鳞癌细胞系Tca8113,同时使用不同浓度的全反式维甲酸(1(M和6(M),同时设空白对照组和正义寡核苷酸探针组。采用Roche的PCR-Elisa试剂盒检测端粒酶活性,绘制生长曲线一观察不同处理因素对细胞生长状况的影响,采用流式细胞仪,通过Annexiv-V和PI双重染色法观察不同处理组间细胞凋亡的差异,此外,采用western blot法检测细胞内hTERT的表达情况。结果:As-ODN-hTR联合5(M ATRA处理组细胞的生长速度明显受抑。As-ODN-hTR能够对Tca8113细胞内端粒酶活性产生明显的抑制作用,但在没有ATRA存在的情况下,这种抑制效果在96小时明显下降。5(M ATRA和As-ODN-hTR组Tca8113细胞内hTERT蛋白表达水平最低,同时细胞凋亡率最高。所有的数据都表明ATRA和As-ODN-hTR对口腔鳞癌细胞内端粒酶的活性具有抑制作用。结论:本研究发现反义核酸探针和全反式维甲酸联合使用对口腔鳞癌端粒酶活性具有明显抑制作用,而同时可以抑制细胞的生长速度,增加细胞凋亡率。