人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备

【摘要】：目的:获得原核表达的人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白,并制备其多克隆抗体。方法: 采用RT-PCR技术从人成牙本质细胞样细胞系中获得cDNA,亚克隆至PUC18载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E．coli表达菌DH5α,以IPTG诱导蛋白的表达,并经Ni-NTA亲和柱层析纯化,SDS- PAGE鉴定。用纯化的抗原制备多克隆抗体并进行Weatern印迹检测。结果:获得的人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1 亚基D亚型特异性cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致。成功克隆并纯化了目的蛋白和多克隆抗体。结论:成功地克隆人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因,建立了原核表达、纯化体系,制备了纯化的人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白。提示人成牙本质细胞样细胞细胞膜上含有L型钙离子通道α1亚基D亚型。

【作者单位】：第四军医大学口腔医学院第四军医大学口腔医学院第四军医大学口腔医学院英国伯明翰大学牙科学院
【基金】：国家自然科学基金(30471889)资助项目
【分类号】：R78

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