人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α_1亚基D亚型特异性基因的表达、纯化和多克隆抗体的制备

【摘要】：目的:获得原核表达的人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白,并制备其多克隆抗体。方法: 采用RT-PCR技术从人成牙本质细胞样细胞系中获得cDNA,亚克隆至PUC18载体中,经测序确证后,将该基因插入原核表达载体pProEXHTb中,通过电穿孔技术转化E．coli表达菌DH5α,以IPTG诱导蛋白的表达,并经Ni-NTA亲和柱层析纯化,SDS- PAGE鉴定。用纯化的抗原制备多克隆抗体并进行Weatern印迹检测。结果:获得的人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1 亚基D亚型特异性cDNA序列与GenBank登录的cDNA序列一致。成功克隆并纯化了目的蛋白和多克隆抗体。结论:成功地克隆人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性基因,建立了原核表达、纯化体系,制备了纯化的人成牙本质细胞样细胞L型钙离子通道α1亚基D亚型特异性蛋白。提示人成牙本质细胞样细胞细胞膜上含有L型钙离子通道α1亚基D亚型。