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《湖北省抗癌协会青年委员会成立大会暨第一届青年学术论坛资料汇编》2009年
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头颈部鳞癌细胞sp细胞亚群分析及放射抗性与SP亚群的关系

任建华  骆志国  莫正英  杨贤子  朱圣明  
【摘要】:目的肿瘤SP细胞代表着一族肿瘤干细胞,这些细胞对化疗药及放疗有内在的高抵抗性,纵使大部分肿瘤细胞被常规治疗方案杀死,只要残存SP细胞,都可能成为肿瘤复发的根源。本研究基于SP细胞对荧光染料Hoechst 33342特异性拒染或淡染的特性,使用荧光显微镜及流式细胞仪对经过荧光染料Hoechst 33342染色的细胞检测及分选,来分析人喉鳞癌细胞系Hep-2、人鼻咽鳞癌细胞系CNE-2中是否存在SP(side population)细胞亚群,及通过γ射线进行辐射诱导放射敏感的Hep-2细胞株,筛选得到具有放射抗拒性的Hep-2R细胞株,以此细胞株为模型,比较Hep-2与Hep-2R细胞的放射生物学特性及二者干细胞亚群SP细胞的比例,以此来探索肿瘤SP细胞与放射抗拒性的关系。方法取贴壁生长的人喉鳞癌细胞系Hep-2、人鼻咽鳞癌细胞系CNE-2细胞,用Hoechst33342染色,荧光显微镜下观察细胞染色情况及进行拒染细胞计数。制备人喉鳞癌细胞系Hep-2、人鼻咽鳞癌细胞系CNE-2细胞悬液,经Hoechst33342和PI染色(其中一组同时加入拮抗剂维拉帕米作为对照),用双光子流式细胞仪分析SP亚群的比例。以人喉鳞癌细胞株Hep-2为实验对象,用γ射线对细胞进行反复照射(单次照射剂量照射637cGy,共照射12次),然后传代培养至细胞形态、增殖状态稳定,得到Hep-2R细胞株,细胞继续传代培养,稳定培养30代以上,获得具有放射抗拒性细胞株Hep-2R,拟合细胞存活曲线比较两种细胞株的放射生物学参数的变化,用流式细胞仪检测两种细胞中SP细胞的变化。结果在荧光显微镜下可见两种细胞大部分细胞胞核经Hoechst33342染色呈现蓝色荧光,少部分胞核蓝色荧光较弱或阴性的为SP细胞,经流式细胞仪分析人鼻咽鳞癌CNE-2细胞中SP细胞比例为16.1%,人喉鳞癌Hep-2细胞中SP细胞比例为9.7%。辐射诱导出一个具有放射抗拒性的Hep-2R细胞株,并已稳定传代培养30代以上且放射抗拒性能稳定,测得其SF2=0.6798、D0=3.24,存活曲线肩区增宽,与人喉鳞癌Hep-2细胞进行比较具有明显的放射抗拒性,Hep-2R细胞中的的SP细胞比例较Hep-2细胞明显升高(12.6%vs9.7%)。结论人喉鳞癌细胞系Hep-2、人鼻咽鳞癌细胞系CNE-2中均存在SP细胞亚群,且比例较高,通过维拉帕米可抑制染料外排而减少SP细胞的比例。通过辐射诱导人喉鳞癌细胞株Hep-2获具有放射抗拒性的Hep-2R细胞,其SP细胞比例升高,表明肿瘤细胞的干细胞亚群SP细胞可能存在放射抗性,是肿瘤细胞产生放射抗性的一个重要因素。
【作者单位】:郧阳医学院附属太和医院肿瘤科
【分类号】:R739.91

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