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《第十九届中国康协肢残康复学术年会论文选集》2010年
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靶向COX-2基因的microRNA真核表达载体的构建及其活性鉴定

赵庆华  
【摘要】:[目的]构建靶COX-2基因的microRNA真核表达载体,评价其转染人喉癌细胞株Hep-2细胞后对COX-2基因的干扰效果。[方法]根据COX-2mRNA序列设计合成4对microRNA片段,定向克隆到pcDNA6.2GW/EmGFPmiR真核表达载体上,采用测序分析鉴定插入序列的完整性,并将其转染至Hep-2细胞株中。采用实时荧光定量PCR鉴定其对COX-2基因表达的干扰效果以得到最佳干扰效果的RNAi片段。[结果]构建的4组重组体插入片段的碱基序列完全正确。4组microRNA片段对Hep-2细胞中COX-2基因mRNA表达水平均有下调,其中COX-2 mi-1组的表达水平最低。[结论]从构建的4组COX-2 microRNA重组体中成功的筛选出最佳干扰靶点质粒,即COX-2 mi-1,为应用microRNA靶向COX-2的基因治疗的研究奠定了基础。
【作者单位】:上海交通大学附属第一人民医院骨科
【分类号】:R440

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