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《第十九届中国康协肢残康复学术年会论文选集》2010年
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RNA干扰环氧化酶2对人腰椎退变终板软骨细胞生长增殖及凋亡的影响

赵庆华  田纪伟  王雷  董双海  王震  刘诚袆  
【摘要】:[目的]观察沉默环氧化酶2(COX-2)基因对人腰椎退变软骨终板细胞增殖、凋亡的影响。[方法]根据COX-2mRNA的序列,分别设计合成4对不同的且能干扰COX-2基因表达的siRNA并筛选出最高效抑制序列,构建以COX-2基因为靶点的RNA干扰质粒并将其转染腰椎退变软骨终板细胞。分为空白对照组(不予任何处理)、阴性对照siRNA组(予以30 nmol/L阴性siRNA)、siRNA1组(予以15 nmol/LCOX-2 siRNA)和siRNA2组(予以30 nmol/L COX-2 siRNA)。siRNA转染48 h后,采用荧光定量PCR法和Western blotting检测COX-2基因表达;WST-8检测细胞增殖情况;实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测细胞凋亡相关基因survivin、bcl-x1、bax基因表达的情况。[结果]构建的4组重组体插入片段的碱基序列完全正确。转染COX-2siRNA 48h后人腰椎退变软骨细胞中COX-2mRNA表达量在siRNA1组和siRNA2组分别为51.3%±7.2%和35.4%±3.6%,均显著低于空白对照组(100%±5.7%)和阴性对照组siRNA(83.4%±2.8%)(P0.05)。Western blotting显示COX-2蛋白表达量明显下降,以siRNA2组表达量最低(P0.05)。WST-8法检测显示4组细胞存活率分别为100.0%±8.3%、84.9%±4.2%、52.5%±6.7%、48.9%±5.4%,siRNA1组和siRNA2组与其他各组相比,差异存在显著性(P0.05)。实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测显示,随着转染浓度的递增,退变软骨细胞中survivin、bcl-2基因表达较对照组显著降低,bax基因表达则较对照组逐渐升高。[结论]RNA干扰COX-2基因能明显抑制人腰椎终板软骨细胞COX-2的表达,抑制细胞生长增殖,并可通过下调抗凋亡基因survivin和bcl-2的表达,上调促凋亡基因bax的表达,从而诱导退变软骨终板细胞凋亡。

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