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《第十九届中国康协肢残康复学术年会论文选集》2010年
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腺病毒介导入VEGF165和ANG-1双基因转染大鼠BMSCs及对其增殖的影响

张金康  孟国林  刘建  胡蕴玉  毕龙  袁志  段春光  李丹  刘民  白峰  黄鑫  禚文昆  马煜  
【摘要】:[目的]探讨携带人血管内皮细胞生长因子165(VEGF165)和血管生成素-1(ANG-1)双基因的腺病毒表达载体pAd-VIA转染大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的体外表达及对BMSCs增殖的影响。[方法]将本室构建的编码人VEGF165和ANG-1双基因的腺病毒质粒pAd-VIA在QBI-293A细胞内进行包装和扩增,体外转染大鼠BMSCs,通过绿色荧光蛋白(GFP)表达、Western-blotting、酶联免疫吸附分析(ELISA)。方法检测外源基因的表达,利用MTT法检测MOI=50、100、200、400pfu/cell不同浓度腺病毒转染后对BMSCs的增殖活性的影响。[结果]重组腺病毒质粒pAd-VIA在QBI-293A细胞内成功包装和扩增,体外转染BMSCs后,有大量的GFP表达,Western-blotting检测显示,转染组与VEGF165和ANG-1抗体结合,在45KD和14.4KD左右出现印迹条带;ELISA结果显示:转染组第1~3 d,上清中的VEGF165浓度和ANG-1浓度持续增加,未转染组均未检测到外源基因的表达,差异有统计学意义(P0.01);不同浓度的腺病毒载体转染BMSCs后,促进细胞增殖,细胞生长曲线上移,在1、3、5、7 d转染组的OD值均大于未转染组,差异有统计学意义(P0.01),第9 d,细胞进入平台期,转染组和未转染组的OD值差异无统计学意义(P0.05)。[结论]重组腺病毒pAd-VIA转染大鼠BMSCs后,外源基因在体外得到有效表达,同时在观察时间内可以促进大鼠BMSCs的增殖。
【作者单位】:第四军医大学西京医院骨科
【基金】:国家自然科学基金(30672142)
【分类号】:R329.2

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