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《江西省第四次中西医结合心血管学术交流会论文集》2008年
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细胞因子信号抑制物SOCS1/JAB介导CT-1对心肌胞急性缺氧复氧损伤的保护作用

李菊香  万磊  夏子荣  苏海  颜素娟  程晓曙  吴清华  
【摘要】:目的通过使用信号抑制子(SOCS1)反义寡核苷酸干预,从细胞和分子水平阐明SOCS1如何介导CT-1对心肌细胞缺氧复氧损伤中保护作用。方法用改良的方法培养出生1~3天的乳鼠心肌细胞,分为5组:(1)对照组:DMEM液培养6小时;(2)缺氧/复氧组:缺氧3h,复氧培养3h;(3)缺氧/复氧+CT-1组(CT-1组):缺氧3h后,加CT-1(10ng/ml)进行复氧3h处理;(4)缺氧/复氧+CT-1+反义SOCS1组(反义SOCS1组,终浓度为10μmol/L):反义SOCS1培养24h后,缺氧3h,加CT-1(10ng/ml)进行复氧3h处理;(5)缺氧/复氧+CT-1+正义SOCS1组(正义SOCS1组,终浓度为10μmol/L):加正义SOCS1培养24h后,缺氧3h,加CT-1(10ng/ml)进行复氧3h处理。MTS法测定心肌细胞的存活率,四氯四乙基苯丙咪唑基羰化青碘化物(JC1)检测心肌细胞线粒体膜电位(mPTP),二氯荧光黄双乙酸盐(DCFH CA)检测细胞活性氧(ROS),心肌细胞凋亡率用流式细胞仪检测。心肌细胞eNOSmRNA和SOCS1mRNA表达采用RT-PCR法,蛋白免疫印迹(Western blot)检测SOCS1和磷酸化STAT3蛋白。结果 (1)缺氧复氧后心肌细胞搏动频率明显减慢,搏动幅度减弱,节律不规整。心肌细胞存活率明显降低,凋亡率明显增加。CT-1处理组搏动频率与缺氧复氧组比明显加快,与对照组相近,节律较整齐。反义SOCS1干预后,频率明显减慢,搏动幅度减弱,节律明显不规则;与CT-1组比较,心肌细胞存活率下降,心肌细胞凋亡率增加,分别为(87.8±7.5%VS 74.8±5.2%;5.8±1.5%VS 12.8±1.5,P均0.05),LDH增加,正义SOCS1并不干扰CT-1的作用。(2)心肌细胞内ROS水平和线粒体膜电位△Ψ的影响:缺氧复氧损伤后心肌细胞ROS水平明显升高(14.28±1.42VS3.54±0.86,P0.001),CT-1组心肌细胞ROS水平较缺氧复氧损伤组下降(6.73±1.21VS 14.28±3.42,P0.01),接近空白对照组。加反义SOCS1干预后ROS水平则明显增加。流式细胞仪结果示:缺氧/复氧损伤组心肌细胞△Ψ明显小于对照组,CT-1组较缺氧复氧升高(12.93±1.46VS 4.62±0.38,p0.05),加反义SOCS1后△Ψ水平则小于CT-1组(6.86±0.75VS 12.93±1.46,p0.05)。正义SOCS1组结果与CT-1组类似。荧光显微镜结果:缺氧复氧损伤组心肌细胞绿色荧光强度明显强于对照组,表明线粒体膜转运孔mPTP受到破坏。CT-1预处理后心肌细胞JC1荧光强度明显减弱,反义SOCS1干预后,心肌细胞mPTP下降,荧光强度增强。而正义SOCS1组结果与CT-1组类似。(3)CT-1对SOCS1mRNA及蛋白表达的影响:缺氧复氧组较空白对照组SOCS1 mRNA表达和SOCS1蛋白水平有所增加;而CT-1组SOCS1 mRNA表达和SOCS1蛋白水平均较缺氧复氧组显著升高(1.596±0.065 vs 0.639±0.063;2.568±0.219 vs1.539±0.127,P0.05),表明CT-1促进心肌细胞SOCS1表达。加SOCS1反义寡核苷酸后SOCS1mRNA和蛋白水平较CT-1组明显下降(1.596±0.065 vs 0.896±0.065;1.945±0.158 vs 2.568±0.219,P0.05),而SOCS1正义寡核苷组与CT-1组无明显差异。(4)心肌细胞磷酸化STAT3蛋白:各组非磷酸化STAT3蛋白水平无明显差异。但缺氧复氧组较空白对照组磷酸化STAT3蛋白表达明显增加(0.672±0.034 vs0.147±0.012,P0.05),而CT-1组较缺氧复氧组显著下降(0.425±0.035 vs0.672±0.031,P0.05),加SOCS1反义寡核苷后磷酸化STAT3蛋白水平明增加(0.593±0.048 vs0.425±0.035,P0.05),而SOCS1正义寡核苷组与CT-1组无明显差异(0.417±0.039 vs0.425±0.035,P0.05),表明SOCS1抑制CT-1引起的STAT3磷酸化。结论细胞因子信号抑制物SOCS1介导了心肌营养素-1减轻缺氧复氧所致的心肌细胞损伤。
【作者单位】:南昌大学第二附属医院心内科
【分类号】:R541

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