收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法的建立

陈祥  徐正中  单法  单锋丽  孟闯  焦新安  
【摘要】:目的本研究旨在建立一种牛γ干扰素ELISPOT检测方法,并评价该方法用于牛结核病检测的价值。方法通过筛选与天然牛γ干扰素特异性结合的单克隆抗体分别作为包被抗体和检测抗体,并探索不同的实验条件确定最佳包被抗体浓度、最佳细胞浓度和最佳检测抗体浓度等,建立牛γ干扰素ELISPOT检测方法。采集30头奶牛尾静脉血并分离外周血单个核细胞,以结核菌素作为刺激原,使用建立的ELISPOT检测方法进行牛结核病检测,并与BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果进行比较。结果筛选到两株与天然抗原特异性结合的牛γ干扰素单抗2G5和5E11,确定ELISPOT检测方法的最佳实验条件为:包被抗体2G5浓度2.5μg/m L,每孔细胞数量2.5×105个,检测抗体Bio-5E11浓度1μg/m L。使用建立的ELISPOT检测方法与BOVIGAMTM ELISA试剂盒对30头奶牛进行同步检测,结果显示,以BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测结果作为参考标准,14头BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测阳性牛中,ELISPOT方法检出的阳性牛为11头,敏感性为78.6%(11/14);16头BOVIGAMTM ELISA试剂盒检测阴性牛中,ELISPOT方法检出的阴性牛为12头,特异性为75%(12/16)。结论应用结核菌素作为刺激原的牛γ干扰素ELISPOT检测方法可用于牛结核病辅助检测,具有潜在的临床应用价值。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前19条
1 王桂芳;;ELISPOT检验对活动性肺结核患者的临床价值[J];山东医学高等专科学校学报;2020年04期
2 郭晓蕾;师志海;曹宗喜;陈朝喜;潘全会;;ELISPOT的技术优势及其在动物免疫研究中的潜力[J];安徽农业科学;2007年25期
3 潘燕玉;李津;王心静;杨秉芬;程小星;;ELISPOT检测在结核性脑膜炎诊断中的研究[J];临床肺科杂志;2015年02期
4 鲁俊鹏;邹潍力;王声会;;酶联免疫斑点技术(ELISPOT)及其应用研究进展[J];广东畜牧兽医科技;2007年06期
5 乐敏莉;刘胜武;;多种影像学检查结合ELISPOT在脊柱结核早期诊断中的价值[J];临床医药文献电子杂志;2017年04期
6 田涌涛;吴雪琼;张香琴;许颖原;;Elispot阅读仪中微孔板精确定位的一种图像方法[J];医疗装备;2012年09期
7 ;Preliminary Study on a Potential Panel for Quality Assurance of ELISPOT[J];Virologica Sinica;2008年05期
8 张培泽;叶涛生;邓永聪;蔡雄茂;陈涛;张明霞;;酶联免疫斑点试验检测技术(Elispot)在诊断结核性脑膜炎及Ⅲ型肺结核中的应用价值[J];临床肺科杂志;2011年05期
9 王雪莲;卢岩;安春丽;;ELISPOT检测人乳头瘤病毒特异性的记忆T细胞[J];微生物学杂志;2011年04期
10 周蜜;张月芹;魏晓玲;;ELISPOT检测技术在结核病诊断中的应用探讨[J];现代医学与健康研究电子杂志;2019年01期
11 熊仲良;邓小红;曾政;;一种有效的免疫学检测技术——ELISPOT[J];动物医学进展;2006年09期
12 张辉,潘志明,焦新安;一种细胞因子检测新方法——ELISPOT技术[J];动物医学进展;2004年06期
13 孙超;李磊;王颖;高娟娟;;ELISPOT(酶联免疫斑点技术)对肺结核诊断价值的Meta分析[J];口岸卫生控制;2018年05期
14 聂明;莫武宁;;ELISPOT技术的应用[J];中国医药导报;2007年30期
15 刘佳;高习习;李巍;程淑晶;李广焱;于汉勋;王钦富;;ELISpot技术检测猪抗口蹄疫γ干扰素方法的建立[J];中国畜牧兽医;2017年01期
16 董璇;李天兴;韩晓群;黄汉平;;酶联免疫斑点试验诊断结核性胸膜炎的临床应用价值[J];中国医药导报;2014年08期
17 郑霖;马玉媛;颜奇坡;叶小丽;郭逸;田克恭;章金刚;;ELISPOT检测高致病性猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒感染后猪γ-干扰素的分泌情况[J];生物技术通讯;2010年05期
18 杨尚波;;ELISPOT辅助临床结核病诊断价值分析[J];饮食科学;2018年02期
19 韩文;张卫平;何萍;多力坤·木扎帕尔;;酶联免疫斑点技术辅助诊断小儿结核性脑膜炎的临床意义[J];新疆医科大学学报;2008年05期
中国重要会议论文全文数据库 前20条
1 陈祥;徐正中;单法;单锋丽;孟闯;焦新安;;牛结核γ干扰素ELISPOT检测方法的建立[A];中国生物工程学会2014年学术年会暨全国生物技术大会论文集[C];2014年
2 吴长有;;ELISPOT实验技术原理及应用[A];2004年慢性乙型肝炎免疫治疗进展学习班论文集[C];2004年
3 赵宁;;酶联免疫斑点(ELISPOT)实验技术及产品介绍[A];2004年慢性乙型肝炎免疫治疗进展学习班论文集[C];2004年
4 刘菲;马丽萍;张宗德;;结核病不同抗原酶联免疫斑点检测的影响因素分析[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
5 张辉;潘志明;焦新安;;一种细胞因子检测新方法:ELISPOT技术[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
6 宋韬;李莉娟;耿书军;;结核菌特异性IFN-γElispot检测在活动性结核病和结核感染诊断中的应用分析[A];中国转化医学和整合医学学术交流会(上海站)论文汇编[C];2015年
7 夏书奇;;ELISPOT技术原理、发展和应用前景[A];2006年慢性乙型肝炎治疗进展研讨会资料汇编[C];2006年
8 Juan Zhang;Jun Jiang;Hong Zhang;Longfeng Ma;Hong Bao;Ting Yu;;DNA Vaccine Construction of Mycobacterium Tuberculosis Ag85A/MPT-64 Fusion gene and the Application of ELISPOT Assay for Immunogenicity analysis[A];第七届全国医学生物化学与分子生物学和第四届全国临床应用生物化学与分子生物学联合学术研讨会暨医学生化分会会员代表大会论文集[C];2011年
9 林晨韬;Ryan Dickerson;黄春兰;林天龙;宋铁英;;ELISPOT技术检测欧洲鳗鲡对创伤弧菌疫苗的免疫应答[A];第八届全国免疫学学术大会论文集[C];2012年
10 李炜;杨倩婷;黄华;周伯平;陈心春;;Elispot检测抗原特异性IFN-γ反应在肺外结核诊断中的应用价值[A];中国防痨协会临床委员会、中国防痨协会基础委员会学术研讨会论文集[C];2008年
11 郑霖;马玉媛;颜奇坡;叶小丽;郭逸;田克恭;章金刚;;ELISPOT检测高致病性PRRSV感染后猪γ-干扰素的分泌情况[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
12 赵静;王海英;景辉;邓云峰;孟祥爱;汪运山;;ELISPOT试验在潜伏结核感染者筛查中的应用[A];中华医学会2008年全国结核病学术会议论文汇编[C];2008年
13 邱丽华;刘志敏;马欣;王学东;蒋雪玲;;结核感染/结核病诊断新技术—ELISPOT[A];2006中国防痨协会全国学会会议论文集[C];2006年
14 王平;;131例结核分枝杆菌ELispot检测阴性结果的原因分析[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年
15 张桂芝;李鸿斌;王静;;ELISPOT技术在免疫抑制患者隐匿性结核感染诊断中的应用[A];第17次全国风湿病学学术会议论文集[C];2012年
16 杨芳芳;方毅敏;董涛;涂志全;赖小敏;;结核分枝杆菌特异性多肽-IFN-γ-ELISPOT技术的建立及其对结核分枝杆菌感染的诊断意义[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
17 孟筱坚;林茂芳;牟海波;傅剑云;章荣华;;应用IFN-γ ELISPOT检测小鼠混合淋巴细胞反应和实验GVHD模型的同种异体反应性T细胞[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
18 杜凤娇;傅瑜;吴雪琼;李亮;高静韬;陈曦;贾红彦;刘义;古淑香;孙琦;邢爱英;杜博平;马玙;张宗德;;结核分枝杆菌RD1区编码蛋白ELISPOT辅助诊断活动性结核病的应用价值[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
19 林玲;谢虹;顾美红;岳建荣;朱秀云;张明霞;陈心春;;结核分枝杆菌特异性IFN-γELISPOT检测活动性肺结核患者密切接触者中结核感染情况分析[A];中国防痨协会80周年纪念暨2013年全国学术大会论文集[C];2013年
20 张宜俊;夏书奇;曾水娣;施理;祖萍;刘惠萍;易学瑞;田增遂;朱义鑫;;慢性乙型肝炎患者HBcAg特异性分泌IFN_γ细胞的ELISPOT检测及其临床意义[A];2006年慢性乙型肝炎治疗进展研讨会资料汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 袁凯;酶联免疫斑点试验在脊柱结核辅助诊断中的应用研究[D];南方医科大学;2013年
2 刘利东;构建登革病毒NS1抗原拓扑图及建立ELISPOT微中和试验快速高通量评价登革病毒抗体中和活性[D];南方医科大学;2012年
3 白宇;马γ-干扰素单克隆抗体的制备及细胞免疫评价方法的研究[D];中国农业科学院;2008年
4 沈科书;酶联免疫斑点法在丙型肝炎合并潜伏结核感染诊断中的应用性研究[D];吉林大学;2012年
5 范行良;新型流感通用疫苗研究[D];第四军医大学;2012年
6 李海;酶联免疫斑点法快速诊断活动性结核病的临床应用研究[D];广西医科大学;2012年
7 张翼;糖尿病谷氨酸脱羧酶(GAD_(65))反应性T细胞的检测及应用研究[D];中南大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前16条
1 俞波;ELISPOT测定肾移植受者免疫反应性及其临床意义[D];第二军医大学;2007年
2 张荣珍;ELISPOT法检测脑脊液抗BCG-IgG分泌细胞对早期结核性脑膜炎诊断价值的研究[D];吉林大学;2008年
3 李峤珂;应用ELISPOT技术检测结核菌感染的研究[D];河北医科大学;2007年
4 杜凤娇;酶联免疫斑点检测对结核性胸膜炎诊断价值的比较研究[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2009年
5 潘燕玉;ELISPOT和IP-10检测用于结核病诊断的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2013年
6 郑霖;猪细胞因子检测方法的建立与初步应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
7 崔秋燕;ELISPOT检测1型糖尿病GAD65特异性T细胞的方法学研究[D];中南大学;2013年
8 李梅;检测NDV诱导特异性IFN-γ、IL-4的ELISPOT试验方法建立及应用[D];山东农业大学;2008年
9 李欣欣;某胸科医院医务人员潜伏结核感染筛查及相关危险因素研究[D];山东大学;2012年
10 叶秋月;肺结节病与肺结核鉴别诊断的临床分析[D];北京协和医学院;2011年
11 刘菲;酶联免疫斑点法在活动性结核病和结核潜伏感染中的诊断价值[D];北京市结核病胸部肿瘤研究所;2008年
12 徐志庆;结核分枝杆菌特异性抗原对人外周γδT细胞产生细胞因子的诱导作用[D];蚌埠医学院;2014年
13 田洪飞;酶联免疫斑点试验联合结核抗原检测对艾滋病合并结核感染的临床诊断价值[D];浙江中医药大学;2012年
14 韩文;酶联免疫斑点技术对小儿结核病的诊断临床意义分析[D];新疆医科大学;2008年
15 王晓玮;MTB特异性蛋白CFP10和ESAT6在结核诊断中临床应用及作用机制的研究[D];安徽医科大学;2016年
16 盛玲玲;Tγδ1和Tγδ17细胞在结核分枝杆菌感染中的免疫作用[D];蚌埠医学院;2013年
中国重要报纸全文数据库 前1条
1 麦迪信;新方法检测肺结核准确快捷[N];医药经济报;2003年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978