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《中国生物工程学会第三次全国会员代表大会暨学术讨论会论文摘要集》2001年
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枯草芽孢杆菌的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

蒋思婧  马立新  
【摘要】:正 寡聚-1,6-葡萄糖苷酶(糊精-6,α-D-葡萄糖水解酶EC3.2.1.10)是能从多糖的非还原端水解α-1,6-糖苷键的外切酶,且能水解合成底物对-硝基苯d-D葡萄糖吡喃糖苷。Suzuki等人研究了适宜不同生长温度的五种芽孢杆菌的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶的性质和氨基酸组成后,提出了脯氨酸法则,即增加脯氨酸出现在β-折叠中的频率和疏水氨基酸中的比例会增强蛋白质的热稳定性。随后一系列利用定点诱变进行脯氨酸替换提高酶的热稳定性的报道都支持了脯氨酸法则,但脯氨酸法则是否具有普适性尚需更多的实验依据。 枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的模式菌,迄今为止尚未见有关枯草芽孢杆菌的寡聚-1,6-葡萄糖苷酶的任何报道。本研究利用质粒pBluescript KS(+),用鸟枪法构建枯草芽孢杆菌HB002(本室筛选)的基因组文库。从4220个重组子中用平板法筛选到六个能水解对-硝

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