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《华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编》2008年
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亚热带植物提取物对酪氨酸酶激活调控的研究

邱凌  陈良华  钟雪  明艳林  童庆宣  陈清西  
【摘要】:生物体中黑色素的生成与酪氨酸酶、酪氨酸和分子氧的浓度密切相关。黑色素形成中的关键酶酪氨酸酶(EC.1.14.18.1)是一种含铜的氧化还原金属酶,广泛存在于微生物、植物、动物中,具有独特的双重催化功能。它能催化酪氨酸羟化产生L-多巴,再将多巴氧化成多巴醌,进而继续反应生成一系列引起褐变的色素类物质。黑色素体的进行性减少或消失而引起的局限性或泛发性脱色素病变是导致白癜风的直接原因。根本原因在于多因素刺激引起的皮肤和毛囊中黑色素细胞的酪氨酸酶活性减低或消失。因此,寻找对酪氨酸酶具有激活作用的效应物,进行药效学研究,是治疗白癜风病症的关键因素。从天然植物中提取的酪氨酸酶激活剂,比化学合成的激活剂有着更广泛安全的应用前景,特别是应用在美容养颜、疾病防治等领域。本文从多种亚热带植物中筛选出10种对酪氨酸酶具有激活作用的亚热带植物的提取物:毛麝香、千里光、翅柄马兰、使君子、冬青、倒地铃、大青、扭序花、白面风、斑鸠菊等。结果表明,所得的提取物在浓度低于0.4 mg/mL时能使蘑菇酪氨酸酶的活力提高1.3~5.0倍。其中白面风的乙醇提取物对酪氨酸酶的激活调控最为明显。提取物对酪氨酸酶的激活动力学的分析和研究对寻找白癜风的有效药物具有理论指导意义。固定提取物的浓度,改变底物浓度,用Lineweaver-Burk双倒数作图求出激活剂作用下的表观米氏常数(Km app)和表观最大反应速度(Vm app),与不加效应物时原始的Km和Vm进行比较,以判定激活剂作用于底物和酪氨酸酶的方式。大多数植物激活剂表现出一种混合性的激活作用,Km值变小,Vm增大,表明提取物在酶促反应体系中,既通过影响底物与酶的结合,又改变酶的空间构型,使酶与底物的亲和力增强,从而提高反应速度。大青乙醇提取物、倒地铃正丁醇提取物、扭序花正丁醇提取物对酪氨酸酶的激活作用表现为Km值减小,Vm值不变。说明这些激活剂激活酪氨酸酶的方式不是提高酶促反应的速率,而是提高酶与底物的亲和力来完成的。

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