收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

高产α-淀粉酶的米曲霉工程菌株的构建

张建军  施碧红  施巧琴  吴松刚  
【摘要】:淀粉酶是一类能将淀粉分子水解为由葡萄糖组成的多聚体分子的酶。α-淀粉酶广泛存在,植物、细菌、真菌是主要的淀粉酶来源。大多数微生物来源的α-淀粉酶都属于糖基水解酶家族13,它们有共同的特征,但是在该家族成员中也发现了酶的反应的特异性。米曲霉(Aspergillus oryzae)在米酒、豆酱、酱油等的工业发酵过程中有上千年的应用历史,因此米曲霉被认为是对人类安全的微生物。美国食品与药品管理局对米曲酶认可程度为GRAS级(Generally Regarded As Safe)。由于米曲霉没有致病性、培养方法成熟、能够向培养基中分泌大量的蛋白质,并且近年来遗传操作技术在米曲霉中应用,使得米曲霉成为生产外源蛋白的优势宿主菌。近年来,几种营养缺陷型(argB,pyrG,niaD and sC)和主要的选择标记(amdS and ptrA)已经被开发用于转化米曲霉。但营缺型菌株常常丧失野生型菌株的一些优良发酵特性。因此构建拥有米曲霉野生菌株优良发酵特性同时具有遗传标记的工程菌株意义重大。本研究通过PCR扩增得到米曲霉α-淀粉酶完整表盒序列,在序列两端连接米曲霉ITS rDNA序列,然后再连接到pBC-hygro载体上,使目的序列在ITS rDNA序列的介导下,转化米曲霉,使其整合到米曲霉基因组序列中,通过潮霉素B抗性来筛选转化子,期望获得α-淀粉酶完整表盒在基因组中的拷贝数增加且α-淀粉酶产量提高的菌株。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 孔显良,左静,姜丽萍;米曲霉5037α-淀粉酶性质的研究[J];微生物学通报;1989年03期
2 孔显良;王俊英;崔雅洁;姜丽萍;;米曲霉6-193α-淀粉酶的纯化和性质的研究[J];微生物学报;1991年04期
3 张志国,韩科,周■,叶海梅,郑毅;真菌α-淀粉酶产生菌的筛选及酶学特性的研究[J];福建轻纺;2005年08期
4 孔显良,王俊英,姜丽萍;食品用米曲霉α-淀粉酶的制备[J];微生物学通报;1992年05期
5 孔显良,左静,孙曾美,齐祖同;产α-淀粉酶的米曲霉菌株筛选及产酶条件的研究[J];微生物学通报;1988年02期
6 张维钦;杨惠英;林哲甫;钟英长;陈家平;朱汝舫;;米曲霉α-淀粉酶的产生及其性质的初步研究[J];中山大学学报(自然科学版);1987年03期
7 龚家玮;随机诱变和利用2-脱氧-D-葡萄糖作为抗代谢物筛选米曲霉α-淀粉酶高产突变株[J];中国医药工业杂志;2002年03期
8 王程,严自正;米曲霉在产脱氨酶过程中的超微结构动态[J];微生物学通报;1990年04期
9 向洋,朱泽瑞,龚岁;米曲霉及激光诱变菌株间的同工酶亲缘关系研究[J];高技术通讯;1997年03期
10 董海莉;平文祥;葛菁萍;;双水相法萃取分离α-淀粉酶体系的初步研究[J];黑龙江大学自然科学学报;2011年03期
11 刘军昌,段作营,沈梅生,毛忠贵;固态发酵生产腺苷酸脱氨酶[J];工业微生物;2002年01期
12 农友业,何勇强,覃燕,吴子恺;米曲霉植酸酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[J];生物技术通讯;2005年01期
13 屈二军;李辰曦;李文建;冯振;陈兰英;;米曲霉原生质体生成条件的研究(摘要)(英文)[J];Agricultural Science & Technology;2010年03期
14 刘丽萍;刘丽华;;米曲霉研究进展与应用[J];中国调味品;2008年04期
15 郑佐兴;米曲霉和黑曲霉营养缺陷型的分离及原生质体的制备[J];工业微生物;1994年01期
16 刘建新,赵国林;骆驼蓬提取物对玉米种子α-淀粉酶和根系活力的影响[J];西北植物学报;2003年12期
17 罗志刚;杨景峰;罗发兴;;α-淀粉酶的性质及应用[J];食品研究与开发;2007年08期
18 李方方;潘力;;米曲霉基因表达研究进展及应用[J];中国酿造;2008年12期
19 刘毅;袁月华;;米曲霉产氨基酰化酶最佳活力条件的研究[J];氨基酸和生物资源;2009年01期
20 武金霞,潘延云,周艳芬;饲用复合酶制剂的发酵及应用[J];河北大学学报(自然科学版);1999年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 吴俐;黄建忠;;米曲霉产α-淀粉酶的分离纯化及酶学特性的研究[A];2004年全国生物技术学术研讨会论文集[C];2004年
2 张建军;施碧红;施巧琴;吴松刚;;高产α-淀粉酶的米曲霉工程菌株的构建[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
3 李勇如;李秀婷;;米曲霉木聚糖酶的研究进展[A];中国食品科学技术学会第七届年会论文摘要集[C];2010年
4 潘艳;王彦峰;汤海峰;;富硒米曲霉发酵条件的探索[A];吉林省第六届生命科学大型学术报告会论文集[C];2008年
5 王金良;林艳;陈宏文;方柏山;;米曲霉为宿主菌的重组表达性质粒的构建[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
6 魏守蓉;薛存宽;何学斌;沈凯;袁彬;蒋鹏;朱军;李颖;曾玲;;绞股蓝多糖降血糖作用的实验研究[A];第二届全国老年医药学学术会议论文集[C];2005年
7 张志国;韩科;柯晶晶;马华章;郑毅;;利用数学统计法快速优化米曲霉α-淀粉酶液体发酵培养基[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2008年学术交流会论文摘要汇编[C];2008年
8 魏福祥;王振川;王焕;胡文磊;;酶催化-超临界CO_2技术从穿山龙中萃取薯蓣皂甙元工艺[A];中国化学会第二十五届学术年会论文摘要集(下册)[C];2006年
9 赵伟华;程建军;任为聪;张智宇;;米曲霉发酵高温变性豆粕的研究[A];黑龙江省农业工程学会2011学术年会论文集[C];2011年
10 黄占旺;上官新晨;程军辉;吴垂双;万飞;;纳豆混合发酵技术研究[A];中国食品科学技术学会第五届年会暨第四届东西方食品业高层论坛论文摘要集[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 王燕;米曲霉氨基酰化酶的固定化及其拆分N-乙酰-DL-苯甘氨酸的研究[D];天津大学;2003年
2 王斌;基于RNA-Seq技术的米曲霉RIB40转录组学研究[D];华南理工大学;2010年
3 李松;米根霉CICIM F0071α-淀粉酶:基因克隆、鉴定与异源表达[D];江南大学;2011年
4 黄冰冰;厚朴活性成分的提取及抗龋机制研究[D];武汉大学;2005年
5 陈红歌;野油菜黄单胞菌α-淀粉酶性质及其体外定向进化研究[D];南京农业大学;2005年
6 郭继平;米曲霉碱性蛋白酶的异源表达和定向进化以及遗传改造[D];哈尔滨工业大学;2008年
7 张革新;α-淀粉酶性能与结构关系的生物信息学研究[D];江南大学;2005年
8 孙俊良;淀粉糊精的制备工艺调控及诱导产α-淀粉酶的研究[D];沈阳农业大学;2009年
9 董绍伟;酶的热稳定性研究及其在棉织物退浆、精练中的应用[D];东华大学;2009年
10 马莺;大豆低聚糖的提取及酶改性的研究[D];东北农业大学;2000年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘晶晶;助剂对α-淀粉酶热稳定性及热失活动力学的研究[D];东华大学;2011年
2 李旋;高产蛋白酶米曲霉的诱变选育及培养条件优化[D];山东轻工业学院;2011年
3 吴海滨;利用米曲霉(Aspergillus oryzae)发酵鳕鱼皮制备生物活性肽的研究[D];中国海洋大学;2011年
4 黄帅;米曲霉和酿酒酵母对奶牛瘤胃发酵及血液生化指标的影响[D];黑龙江八一农垦大学;2011年
5 王惟;脲和盐酸胍以及钙离子和氯离子对猪胰腺和芽孢杆菌α-淀粉酶分子结构的影响[D];西北大学;2011年
6 李玉强;丝状真菌β-半乳糖苷酶的研究[D];天津轻工业学院;2000年
7 闫亚婷;固态发酵玉米条件的优化及营养物质变化的比较研究[D];四川农业大学;2010年
8 冷云伟;酱油曲中米曲霉及制曲工艺的研究[D];江南大学;2004年
9 宋智;分子克隆和分析一种丝状真菌米曲霉(Aspergillus oryzae)的六个基因5’端上游区域[D];广西大学;2003年
10 朱中南;米曲霉α-淀粉酶发酵优化、分离纯化与酶学特性的研究[D];福建师范大学;2012年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 中国农业大学 陆文清博士;评价饲料酶质量的5种指标[N];中国畜牧报;2005年
2 张璐 本报记者 廖俊杰 杨树义;光大传统品牌 铸造美食精品[N];中国食品质量报;2005年
3 济南大学 张炳文;为了健康吃豆豉吧[N];科技日报;2003年
4 王道坤;鸡粪作饲料 又有新门道[N];湖南科技报;2007年
5 高新;糖化增香曲为酱油生产企业创效益[N];中国食品质量报;2007年
6 吴敏 杨政水;生物制剂在肉类加工中的应用[N];中国食品质量报;2004年
7 寿南山;黄酒的种类及药用[N];大众卫生报;2007年
8 郭凤莲 陈存社;微生物制备复合酶制剂研究进展[N];中国食品质量报;2009年
9 阿玲;食品污染主要有什么?[N];中国水利报;2002年
10 ;青贮饲料时如何促进乳酸发酵[N];中国畜牧兽医报;2008年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978