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人B7-H3在骨髓基质细胞体外诱导为成骨细胞过程中的表达特性和生物学作用

徐岚  
【摘要】:建立人骨髓基质干细胞(hMSCs)体外分离、培养成骨细胞的方法,观察成骨细胞形成时间、数量的变化,及对成骨细胞相关细胞因子的影响;同时加入鼠抗人B7-H3功能性抗体,倒置显微镜、免疫组织化学、流式细胞仪、ELISA、RT-PCR、等方法观察分析人B7-H3分子在骨髓基质干细胞体外诱导为成骨细胞过程中的表达特性和生物学作用。结果显示:加入鼠抗人B7-H3功能性抗体具有促进人骨髓成骨细胞的形成。细胞上清的测定显示:两抗体作用组ALP、ACP呈上调表达,Ca~(2+)的含量下降;14d细胞ALP染色阳性率,21d Von Kossa染色矿化阳性率高于对照组;且鼠抗人B7-H3单抗作用组OPG mRNA在第14d呈上调表达,而RANKL mRNA在第21d表达下调:免疫组织化学结果显示14d OC,OPG阳性率高于对照组;流式细胞仪分析人B7-H3在骨髓成骨细胞定向分化中呈高表达。结论:本实验首次证实人成骨细胞表达B7-H3分子,且人B7-H3分子具有促进骨髓基质细胞体外诱导为成骨细胞的能力,并能引起与骨代谢相关的部分生物因子的mRNA转录和蛋白质表达的变化。总之,我们成功地建立体外人骨髓成骨细胞定向诱导这个模型,在此基础上,揭示了人B7-H3分子在骨髓基质细胞体外诱导为成骨细胞过程中的表达特性,初步探讨其可能的作用机制及在成骨细胞形成过程中的生物学意义。对阐明共信号分子在骨代谢中的精确调控具有重要的意义,为进一步用于骨质疏松症,骨硬化症等疾病的治疗提供实验依据。

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