收藏本站
《中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集》2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

猪瘟病毒E~(rns)和E2基因的高效表达与E~(rns)-ELISA鉴别诊断方法的建立

贾洪林  仇华吉  李国新  朱庆虎  李娜  童光志  
【摘要】:猪瘟(classical swine fever,CSF)是由猪瘟病毒(classical swine fever virus,CSFV)引起的一种高度传染性和致死性疾病。为建立与以猪瘟病毒囊膜糖蛋白E2为基础的标记疫苗相配套的鉴别诊断试验,本研究克隆了猪瘟病毒石门系强毒株Erns基因和E2基因主要抗原编码区,同时分别将其在大肠杆菌中进行了高效表达,并建立了基于重组蛋白抗原的Erns-ELISA和E2-ELISA诊断方法。设计并合成跨越CSFV Erns基因和E2基因主要抗原编码区序列的特异性引物,采用RT-PCR方法从CSFV石门系强毒株基因组RNA中扩增出0.7kb的完整Erns基因片段,从含有E2基因的重组质粒pcCDST中扩增出0.4kb的部分E2基因片段,分别将其克隆于原核表达载体pPROEXTMHTc和pPROEXTMHTb中,经酶切和PCR鉴定后,再进行序列测定。结果表明,Erns基因编码区核苷酸序列长度为723bp,编码240个氨基酸残基;部分E2基因片段的核苷酸序列长384bp,编码128个氨基酸残基,分别与GenBank中收录的CSFV石门系强毒株(GenBank accession No.AF092448)对应序列一致。阳性菌经IPTG诱导后获得高效表达,表达产物经SDS-PAGE分析,结果显示,表达的重组Erns融合蛋白和截短的重组E2融合蛋白分子量分别为31ku和19ku左右,分别占菌体总蛋白的27.6%和33.5%。Western blotting分析表明,表达的融合蛋白均具有免疫反应性。将表达的融合蛋白分别进行亲和层析纯化,得到纯度很高的目的蛋白。用纯化的Erns融合蛋白作为包被抗原建立了Erns-ELISA,经优化,抗原最适包被量为0.15μg,血清工作浓度为1:100倍稀释,阳性判定标准为OD490(?)0.3。经敏感性试验、特异性试验、阻断试验和重复性试验表明,本研究建立的Erns-ELISA简便、敏感、特异、稳定。通过对90份血清进行平行盲测,Erns-ELISA与E2-ELISA的符合率高达96.7%,与基于病毒抗原的Dot-ELISA的符合率达77.5%。总之,本研究高效表达了猪瘟病毒Erns与部分E2基因,建立了Erns-ELISA和E2-ELISA,可以作为基于E2蛋白的猪瘟标记疫苗的配套鉴别诊断技术,用于今后的猪瘟扑灭计划。

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陈凤莲;马玲;潘汉世;黄红梅;孙建华;陈忠伟;吴健敏;;广西野猪猪瘟病毒感染情况的调查报告[J];中国畜牧兽医;2007年08期
2 周泰冲;猪瘟病毒与防制猪瘟的研究进展[J];中国兽医科技;1980年04期
3 胡杰;磨龙春;黄夏;刘棋;陆文俊;;规模猪场猪瘟野毒感染情况调查[J];中国畜牧兽医;2009年02期
4 李国江;胡娜;张立春;;ELISA法检测猪瘟抗体消长规律的试验研究[J];中国动物检疫;2009年11期
5 马利青;猪瘟的研究动态[J];青海畜牧兽医杂志;1998年02期
6 张朝红;张彦明;张永国;郭抗抗;魏中锋;孙裴;;猪瘟病毒4种检测方法的比较[J];西北农林科技大学学报(自然科学版);2007年05期
7 许保疆;陈陆;游一;刘春生;郑鹿平;王川庆;;抗猪瘟病毒单克隆抗体的制备及其生物学特性鉴定[J];华北农学报;2009年03期
8 刘胜江,王思训,张道华;猪瘟免疫监测的研究——Ⅰ.猪瘟弱毒纯化抗原的制备[J];南京农业大学学报;1987年04期
9 王琴,宁宜宝;猪瘟免疫失败的主要原因分析[J];当代畜禽养殖业;2003年07期
10 樊福好;慎用“乳前免疫”[J];中国动物保健;2004年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 贾洪林;仇华吉;李国新;朱庆虎;李娜;童光志;;猪瘟病毒E~(rns)和E2基因的高效表达与E~(rns)-ELISA鉴别诊断方法的建立[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集[C];2004年
2 陈杰;;猪瘟检测技术的研究进展[A];首届中国兽药大会——兽医生物制品学、兽医微生物学学术论坛论文集(2008)[C];2008年
3 杨瑞梅;;猪瘟诊断方法研究进展[A];人畜共患传染病防治研究新成果汇编[C];2004年
4 李静姬;;应用ELISA法诊断非典型猪瘟的报告[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
5 杨林;赵德明;王秀荣;;猪瘟病毒黑龙江流行株的分离鉴定(黑龙江地区猪瘟病原检测)[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第六次研讨会论文集[C];2005年
6 刘少宁;张兴晓;邹金峰;谢之景;朱岩丽;赵钦;周恩民;姜世金;;检测DuCV抗体ELISA方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
7 黄立平;刘长明;危艳武;陆月华;郭龙军;;检测猪圆环病毒2型血清中和抗体阻断ELISA方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会畜牧兽医生物技术学分会暨中国免疫学会兽医免疫分会第八次学术研讨会论文集[C];2010年
8 王辉;姚松涛;刘群;;检测弓形虫血清抗体的SPA-ELISA诊断方法的建立及应用[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
9 李文良;毛立;张纹纹;江杰元;;猪瘟病毒E2蛋白IgM抗体间接ELISA检测方法的建立[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第三次学术研讨会论文集[C];2012年
10 乔明明;申屠芬琴;马永缨;杨欣艳;杨璐;孙明;;猪瘟抗体间接ELISA检测试剂盒研究[A];中国畜牧兽医学会养猪学分会第五次全国会员代表大会暨养猪业创新发展论坛论文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 季作善 曹同德 李连任;我国猪瘟流行现状与防治对策[N];中国畜牧报;2003年
2 菏泽市兽医站 徐梅 李翠玲 王亚丽 王传朴;哺乳仔猪猪瘟的诊断[N];山东科技报;2002年
3 中国兽医药品监察所 国家猪瘟参考实验室 丘惠深 研究员;猪瘟带毒母猪综合征[N];中国畜牧报;2004年
4 黄晓想 李艳伦;猪瘟综合防治技术[N];中国畜牧报;2002年
5 张德晨;控制猪瘟的有效手段超前免疫[N];中国畜牧报;2003年
6 余广海;猪瘟疫苗为何能“治”猪瘟[N];中国畜牧水产报;2001年
7 薛志成 胡建敏;冬春猪瘟猪流感咋防治[N];山西科技报;2003年
8 张建刚;当前猪瘟流行的新特性[N];中国畜牧报;2003年
9 行唐县畜牧局兽医防疫站 金秀英;猪发高烧会是得啥病[N];河北科技报;2009年
10 中国兽药监察所 副研究员 王琴;猪瘟病毒E2基因的研究进展及其应用[N];中国畜牧水产报;2000年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘建玲;猪瘟病毒E2基因在PK-15细胞中的表达及本体动物的免疫研究[D];西北农林科技大学;2006年
2 郭焕成;猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪瘟病毒寡核苷酸芯片的研究与应用[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
3 何继红;阿维菌素类药物多残留分析方法的研究[D];中国农业大学;2005年
4 韩雪清;猪瘟病毒E2基因遗传变异及体外表达研究[D];西北农林科技大学;2002年
5 涂长春;中国猪瘟流行病学现状与防制研究[D];中国农业大学;2004年
6 张富强;应用噬菌体展示技术进行猪瘟病毒结构(糖)蛋白E2和E~(rns)中和抗原表位鉴定和比较[D];中国人民解放军军需大学;2002年
7 曹丙蕾;山羊IL-18定量抗原捕获ELISA检测方法的建立及其免疫增强作用的研究[D];山东农业大学;2010年
8 刘伯华;猪瘟病毒E2基因在大肠杆菌中的高效表达及其表达产物的制备[D];中国人民解放军军需大学;2002年
9 杨林;猪瘟病毒基因芯片诊断技术的研究及应用[D];中国农业大学;2005年
10 商绍彬;猪圆环病毒衣壳蛋白抗原表位的精细定位与间接ELISA检测技术[D];浙江大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 满朝来;猪瘟病毒HL-LY地方株E2基因在毕赤酵母中的表达及高效表达条件的探索[D];东北农业大学;2003年
2 赵志军;猪瘟病毒E2基因克隆、序列分析及最佳猪瘟免疫程序的制定[D];河北农业大学;2003年
3 姚淑瑜;猪瘟病毒E2基因杆状病毒转移载体的构建及病毒诱导细胞凋亡的研究[D];广西大学;2004年
4 刘春红;猪瘟病毒C、NS5A、NS5B蛋白原核表达及应用[D];湖南农业大学;2010年
5 韦栋平;猪瘟病毒广西流行株E_2基因扩增与反应条件的优化研究[D];广西大学;2001年
6 吴显实;广西猪瘟流行毒株全基因组的克隆与序列分析[D];广西大学;2003年
7 姜庆;比较猪瘟病毒兔化毒株和石门株5端非编码区对病毒翻译的影响[D];山东师范大学;2011年
8 刘艳;猪瘟细胞苗生产工艺的优化及ELISA法在抗原定量测定中的应用[D];山东轻工业学院;2011年
9 韦英益;猪瘟病毒SM株单克隆抗体的制备、初步鉴定及应用研究[D];广西大学;2004年
10 顾玲;猪瘟病毒E2基因乳腺特异表达载体的构建与细胞表达的研究[D];西北农林科技大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026