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《中国毒理学会生物毒素毒理专业委员会第4次、中国生物化学与分子生物学会毒素专业组第5次学术研讨会论文摘要》2001年
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菜花烙铁头蛇毒丝氨酸蛋白酶的基因克隆、序列分析及三级结构模拟

金扬  吕秋敏  魏继福  李东升  王婉瑜  熊郁良  
【摘要】:提取菜花烙铁头毒腺总RNA,通过反转录PCR(RT-PCR)扩增出菜花烙铁头毒腺中几种丝氨酸蛋白酶的cDNA,克隆到pMD18-T vector,并测定了它们的全序列,推导出它们编码的蛋白质序列.发现它们是分泌蛋白,包括信号肽和丝氨酸蛋白酶成熟肽两个部分.与其它蛇毒丝氨酸蛋白酶比较,它们的信号肽和成熟肽的蛋白质一级结构具有较高的同源性.含有12个半胱氨酸推测可形成6对二硫键.以前发现的丝氨酸蛋白酶的N-末端总是V/I-I/F-G-G-D-E-C-N-I-N-, 但是我们发现两个菜花烙铁头丝氨酸蛋白酶的N-末端却是V-F-G-G-R-P-C-N-I-N-和I-I-G-G-H-P-C-N-I-N.利用计算机软件对这些丝氨酸蛋白酶的分子量、等电点等理化性质进行了计算.分析了它们与其它蛇毒丝氨酸蛋白酶的亲缘关系;发现丝氨酸蛋白酶基因为一种加速进化的模式.用Swiss-Model模拟了其中一个丝氨酸蛋白酶的三级结构.这些研究对研究菜花烙铁头蛇毒的蛇毒丝氨酸蛋白酶结构与功能的关系以及从菜花烙铁头蛇毒中开发血栓治疗药物打下了良好的基础.

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