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《中国实验动物学会第七届学术年会论文集》2006年
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家兔移植性肝细胞癌模型的建立

陈华  谢忠忱  郭雄明  刘亚千  吴晓红  黄丽洁  苟鹏  贾琳  李春海  
【摘要】:目的建立家兔移植性肝细胞癌模型,同时进行二乙基亚硝胺(DEN)诱发家兔肝癌研究,并获得家兔肝细胞癌裸鼠移植株,为肝癌研究提供新的实验材料和手段。方法①DEN诱发家兔肝癌:40只雄性日本大耳白兔,在1/6肝切除术后, 以浓度为0.002%的DEN水溶液代替饮水投喂,4周后浓度降至0.001%,并直至实验结束。实验过程中,定期检测血清GOT、 GPT、γ-GT及AFP;定期作超声检查;对存活至23个月的5只动物取直径0.8cm以上的肿瘤性结节(5个/肝),做H.E染色,核仁组成区嗜银相关蛋白染色,以及C-myc、P53蛋白和AFP免疫组化染色,光镜观察;每例肝脏肿瘤同时做透射电镜检查。②家兔肝癌裸鼠移植瘤的建立:以上5只家兔各取1块肿瘤组织接种裸鼠,成活的移植瘤在裸鼠体内反复传代,在第 10代和第15代对肿瘤的生长特性、病理形态进行检测。③家兔体内传代研究:将兔肝癌裸鼠移植瘤在家兔眼前房和肝脏接种,同时皮下注射20mg/kg/d的环孢霉素A(CsA),观察肿瘤生长情况,成活的肿瘤继续在家兔体内传代,直至肿瘤传代生长性状稳定,进行移植瘤生物学特性鉴定。结果与结论本实验用DEN成功地诱发了家兔肝脏肿瘤,每只家兔应用DEN的总剂量约为3300-3800mg,诱发周期19-20个月,肝癌的发生率为9/11;DEN诱发的家兔肝脏肿瘤均为弥漫性多结节性肿瘤, 同一肝脏的不同肿瘤结节性质存在不同;DEN诱发家兔肝癌的发生与c-myc基因和AFP的过表达以及p53基因的突变有关, 本研究结果支持在肝细胞癌癌变过程中,c-myc基因的异常表达出现较早,p53基因的突变为肿瘤发展后期事件的观点;本研究获得了一个家兔肝细胞癌裸鼠移植株,该瘤株基本保留着原发瘤的形态学特点,分泌AFP,接种裸鼠的潜伏期8d左右, 成瘤率10/10,生长缓慢,无自发消退;兔肝细胞癌裸鼠移植瘤在应用20mg/kg/d的CsA条件下,接种同品种家兔眼前房得以成活生长,目前已传代至第5代,CsA的剂量降至10mg/kg/d。

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【参考文献】
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