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《第三届全国中医药免疫学术研讨会论文汇编》2006年
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丹参酮Ⅰ、ⅡA对LPS诱导THP-1增殖作用及其差异蛋白质分析

张萃  王培训  周联  董燕  王青  潘华新  王文君  曹柳英  梁瑞燕  
【摘要】:革兰阴性细菌的内毒素(endotoxin)是细菌细胞壁外膜层的一个毒性成分,主要为脂多糖(lipopolysaccharide,LPS),致病作用非常广泛。目前西药拮抗内毒素治疗在临床上没有产生显著的治疗效果,而中药防治内毒素性休克的研究上初步显出优势,尤其利用中药具有调节机体炎症反应、保护细胞、器官功能方面有着突出特点的情况下进行研究更有重要的价值。本研究主要目的从免疫学角度探讨中药丹参酮Ⅰ、ⅡA抗内毒素作用过程是否可以通过改善或逆转内毒素对单核/巨噬细胞内某些蛋白质表达的变化,在细胞整体水平上分析对细胞内过度表达或降低的蛋白质影响。本文首先在细胞水平上建立LPS诱导的细胞模型(可选择在炎症过程中起主要作用的人单核/巨噬细胞株THP-1细胞),在对中药有效成分丹参酮Ⅰ、ⅡA抗LPS诱导的内毒素细胞模型基础上, 进一步利用蛋白质组学技术(2-DE和蛋白指纹图谱),在细胞水平上寻找中药作用的差异蛋白质。结果表明丹参酮Ⅰ、ⅡA可明显抗LPS诱导的内毒素细胞模型增殖作用,同时可抑制模型绌胞TNF- α、IL-1β的产生。在2-DE上分析丹参酮ⅡA对差异蛋白上调率为46.2%,下调率为50%; 丹参酮Ⅰ对差异蛋白上调率为43.8%,下调率为50.0%。通过蛋白指纹图谱(SELDI-TOF-MS)分析蛋白磷酸化和去磷酸化过程中,两种芯片WCX2、IMAC3各捕获到两对蛋白质,分子量相差80Da 左右。以上结果表明活血化瘀类中药有效成分丹参酮Ⅰ、ⅡA可以改善内毒素致炎过程中TNF-α、 IL-1β的过度表达,同时可以使内毒素细胞模型增高或降低的差异蛋白质恢复或接近正常水平。因此进一步说明把双向电泳技术与蛋白指纹技术结合起来分析中药作用的差异蛋白质变化的可行性,并为中药有效组分的分子药理研究建立新的模式。

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