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由慢病毒编码β-catenin shRNA产生的Wnt信号通路对鼠颅骨愈合的影响

张蕾  Xu  Jiajia  Meyers  Carolyn  Yan  Noah  Zou  Erin  Ding  Catherine  Ting  Kang  Soo  Chia  Pang  Shen  James  Aaron  Chang  Leslie  
【摘要】:研究目的:从胚胎时期的骨骼类型,到胎儿骨的发育和骨修复,Wnt/β-catenin信号通路在成骨中都扮演了十分重要的作用[1]。体内拮抗Wnt信号通路的方法包括系统性拮抗或暂时性拮抗,包括基因途径[2],应用小分子抑制剂[3],或中和抗体[4]。我们设计了一个能够在骨组织中局部应用并暂时可控的Wnt/β-catenin信号抑制剂。研究方法:首先在体内验证了β-catenin抑制能够影响颅骨愈合。然后将β-catenin shRNA编码的慢病毒或有GFP标记的随机序列sh RNA分别皮下注射到18周的NOD-SCID鼠的颅骨中线。在7天后,在NOD-SCID鼠的额骨或顶骨上分别做1.8mm的缺损。4周后,通过microCT,组织学分析,免疫组化等对结果进行分析。研究结果:慢病毒介导β-Catenin shRNA在体外抑制了73%鼠的骨髓间充质干细胞,在体内抑制了59%的骨愈合(图1)。在用慢病毒编码的β-catenin shRNA处理过的鼠中,从microCT重建中能看到额骨缺损愈合受到明显抑制(图2),定量骨愈合分析得到同样的结果(图3)。HE染色和组织学切片验证了同样的结果(图4)。免疫组化也验证了同样的结果(图5)。研究结论:慢病毒编码的β-Catenin shRNA对于抑制成骨有效,相比于顶骨,对于额骨的抑制作用更加明显。

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