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《第七次全国口腔药学学术会议论文汇编》2018年
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Emdogain对不同共培养条件下成骨细胞及内皮细胞增殖与分化的影响

王珊珊  Xiaohui Rausch-Fan  Oleh Andrukov  林毅  曹裕杰  黄跃  廖云阳  施斌  
【摘要】:目的通过建立不同Emdogain浓度下成骨细胞与内皮细胞直接与间接共培养模型,评价Emdogain对不同共培养条件下成骨细胞和内皮细胞增殖与分化的影响以及它们间的相关性。方法将人脐静脉内皮细胞(HUVEC)和成骨样细胞(MG63)按2:1的比例于12孔板内进行直接及间接共培养,并使用不同浓度(0、0.1、1、10、50ug/ml)的Emdogain作用共培养细胞72小时。采用细胞计数仪结合流式细胞仪评价细胞增殖情况,并通过荧光激活流式细胞分选技术分选共培养细胞。对分选后成骨及内皮细胞采用实时荧光定量PCR分别检测成骨相关基因:碱性磷酸酶(ALP)、I型胶原蛋白(COL-1)及成血管相关基因:血管内皮生长因子(VEGF)、VEGF酪氨酸激酶受体1(Flt-1)、VEGF酪氨酸激酶受体2(KDR)、von Willebrand因子(vWF)、内皮细胞C蛋白受体(EPCR)、E选择素(E-Selectin)、促血管生成素-2(Ang-2)的表达水平。结果在直接与间接共培养条件下,Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖的作用具有药物浓度依赖性。随Emdogain浓度增加,细胞增殖率逐渐下降。50ug/ml浓度Emdogain对MG63及HUVEC细胞增殖抑制作用均最为明显。随Emdogain浓度增加,MG63表面ALP和COL-1表达水平逐渐增加。50ug/ml组ALP表达水平最高且与其他组基因表达水平差别有明显统计学意义(P0.01)。同一Emdogain浓度条件下,直接共培养MG63表面ALP及COL-1表达水平均明显高于间接共培养,且有统计学意义(P0.01)。除10ug/ml组外,直接共培养条件下VEGF表达水平均明显高于间接共培养(P0.01)。50ug/ml组直接共培养的HUVEC表面Flt-1、KDR、vWF、E-selectin基因表达水平明显高于间接共培养,也明显高于直接共培养的其他各组(P0.01)。间接共培养实验组HUVEC表面EPCR及Ang-2基因表达水平高于直接共培养组(P0.05)。结论共培养条件下,Emdogain对成骨细胞和内皮细胞增殖的作用具有浓度依赖性。50ug/ml可能是Emdogain作用的关键浓度,在直接共培养条件下50ug/ml Emdogain抑制成骨及内皮细胞增殖,但能同时促进成骨及内皮细胞分化,该作用明显强于间接共培养条件,细胞间直接交联可能在其中发挥重要作用。

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