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《全国第八次牙体牙髓病学学术会议论文汇编》2011年
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粪肠球菌ATCC19433的蛋白质组学分析

郭黎洋  胡涛  
【摘要】:目的:本课题通过采用蛋白质组学的方法对粪肠球菌ATCC19433进行分析,以获得其蛋白质组信息。方法:样品制备:粪肠球菌ATCC19433菌株在PYG培养基中于37℃恒温培养箱中震摇培养24小时。收集细菌加入2%SDS和蛋白酶抑制剂,裂解细菌得到的样品。而后估算蛋白含量。SDS-PAGE:Tris-甘氨酸SDS-PAGE层积胶浓度5%,分离胶浓度10%。电泳采用恒定电流:层积胶恒定电流1 0mA,分离胶电流30mA。电泳结束后,用考马斯亮蓝染液染色凝胶。蛋白的酶解:不同条带切为连续的胶条。把胶条处理为约胶粒并标记分装后,以1/1比例配置1 00%乙腈(CH3CN)20mM与20mM碳酸氢胺(NH4HC03)脱色液,去除染色。而后在样品加入1 00%乙腈干燥胶粒。完成后在胶粒中加入胰酶溶液于37℃中酶解,之后提取含有肽段的上清液保留。再加入提肽液(3ml CH3CN,15μl三氟乙酸,3ml去离子水)提取含有肽段的上清液。最终,将上清在负压干燥机中37℃干燥。将提取的样品进行ESI-TOF-MS质谱检测。数据处理:质谱所得到的蛋白数ixscience工具下进行蛋白序列的鉴别。蛋白质的鉴定,使用Swiss Proto数据库完成。结果:质谱检测后的数据通过与蛋白序列数据库进行比较,共发现了109种蛋白序列。其中,粪肠球菌的蛋白序列共有40种。这里包括有粪肠球菌的多种结构蛋白、代谢酶、蛋白合成过程中的分子和部分信号分子。发现的其他细菌的蛋白成分则多为相似的蛋白序列。结论:本次研究中,采用蛋白质组学的方法对粪肠球菌ATCC 19433的蛋白组进行了鉴定和分析。所得的结果鉴定出了粪肠球菌的多种的细菌的结构蛋白、酶类和信号分子。部分了解了粪肠球菌ATCC 19433的蛋白组的规模和组成,为今后的更深入探讨打下了基础。

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