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牙齿发育过程中Pax9和Msx1对BMP4转录调控作用的研究

孔辉  王莹  朱庆林  余擎  Gabriele Mues  Rena N.D'Souza  
【摘要】:目的:研究牙齿早期发育阶段,BMP4基因启动子转录起始位点上游6kb的区域内Pax9和Msx1的结合位点。方法:利用染色质免疫共沉淀(ChIP)技术。取E14.5的CD1小鼠牙胚,在1%多聚甲醛的作用下将染色质与蛋白质交联,经酶消化法将染色质断裂成小片段DNA,利用Pax9和Msx1的抗体分别收集蛋白/DNA复合物,与Pax9结合的DNA片段和与Msx1结合的DNA片段分别经过纯化后,利用BMP4启动子区域的特异性引物进行PCR扩增分析。结果:在E14.5的小鼠牙胚中,BMP4启动子转录起始位点上游6kb和4.6kb的区域有Pax9的结合位点。在BMP4转录起始位点上游6kb的区域内,没有Msx1的结合位点。结论:BMP4启动子区存在Pax9的结合位点,提示Pax9直接介导了BMP4的基因表达调控,而在6kb的区域内没有发现Msx1的结合位点,表明Msx1对BMP4转录调控的作用有可能是间接的。

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