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转人4-1BBL基因肿瘤细胞的制备及体外抗肿瘤作用的研究

杨宏宇  孙顺涛  余术宜  唐王景  汪海燕  
【摘要】:目的:构建转人4-1BBL基因肿瘤细胞株,探讨转4-1BBL肿瘤细胞体外诱导抗肿瘤活性的能力。方法:通过脂质体法将重组载体pEGFP/neo-4-1BBL转染人口腔鳞癌细胞Tca8113,经G418(400-600ug/ml)筛选及有限稀释后获得稳定高表达克隆,用RT-PCR检测转染细胞中h4-1BBL mRNA的表达;用流式细胞术检测转染细胞表面h4-1BBL分子的表达。将转染与未转染4-1BBL基因的Tca8113细胞用丝裂霉素C(MMC)(10μg/ml)处理后,制成肿瘤细胞瘤苗。用淋巴细胞分离液分离纯化的人外周血T淋巴细胞,用抗CD3 mAb扩增T细胞,并与h4-1BBL基因转染及未转染的Tca8113瘤苗混合培养。用CCK-8比色法检测CTL的杀伤活性;胎盘蓝计数法检测T细胞增殖,ELISA检测培养上清中细胞因子(IL-2、IFN-γ)分泌水平。结果:h4-1BBL基因真核表达载体在Tca8113细胞中获得稳定表达。与未转染的细胞相比较,h4-1BBL基因转染的肿瘤细胞Tca8113能更有效地刺激T细胞活化、增殖,促进IL-2,IFN-γ分泌,并能有效地诱导CTL产生针对野生型Tca8113细胞的特异性杀伤。上述瘤苗能诱导淋巴细胞产生针对亲本的Tca8113细胞的特异性杀伤作用(P0.05)。结论:4-1BBL基因转染的肿瘤细胞介导的协同刺激信号,能增强野生型肿瘤细胞的免疫原性,诱导T细胞产生有效的抗肿瘤免疫应答。

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