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《2009年海南省微生物学检测及质量保证研讨会论文集》2009年
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农杆菌介导的香蕉枯萎病菌4号生理小种高效遗传转化体系的建立及影响因子的优化

高剑  肖苏生  曾涛  曾会才  
【摘要】:本文针对香蕉枯萎病菌4号生理小种这一危害极大的有害真菌,建立了农杆菌介导的该生理小种的转化体系,确定了影响转化效率主要因子的最佳条件分别是:农杆菌在IM培养基AS诱导前,农杆菌OD600为0.15,Focr4孢子浓度为1×10~6个/ml,培养温度为25℃,诱导培养基pH值为5.5,共培养时间为48小时。在此条件下,转化效率达到700-800个转化子/10~6个香蕉枯萎病菌孢子。PCR验证表明外源的T-DNA已经成功随机地整合到该病原菌基因组中。应用该转化体系已获得2300个转化子,为研究该生理小种致病机制奠定了基础。另外,通过培养基的筛选,在PDA,CMC,查氏,K2,PPA,MBA和PSA中,发现K2培养基最适合大量小型分生孢子的产生,单核的分生孢子作为受体可以得到后代不分化的转化子,有利于通过致病性测定很快的筛选到致病相关基因,更有利于T-DNA插入侧翼序列的克隆。

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
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