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《中国活性氧生物学效应学术会议论文集(第一册)》2011年
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栽培菊苣提取物KJ-I对肝细胞的保护作用及其抗氧化机制的初步研究

陈超杰  展丽娟  秦海林  王爱平  
【摘要】:目的考察栽培菊苣提取物(KJ-I)对H_2O_2致HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探索KJ-I在HepG2细胞中抗氧化作用的机制。方法经H_2O_2处理HepG2细胞建立肝细胞氧化应激损伤模型,通过MTT法和DCFH-DA荧光染色,考察KJ-I对受损细胞的保护作用。并通过检测KJ-I对抗氧化反应元件(ARE)报告基因转染稳定的HepG2细胞的ARE-Luciferase活性和含有ARE序列相关基因的mRNA表达水平,探索KJ-I对肝细胞的抗氧化防御体系的作用机制。结果经MTT法检测,4 mmol/L H_2O_2处理HepG2细胞3h后细胞存活率下降(58.88±1.62%),而12.5、25、50和100mg/L的KJ-I处理受损细胞的存活率皆显著上升(其存活率分别是61.27±1.39%、62.77±2.01%、66.29±1.78%和70.12±1.46%;其中,25mg/L的KJ-I治疗组与模型组相比,p0.05;50和100mg/L的KJ-I治疗组与模型组相比,p0.01;n=6)。经DCFH-DA荧光染色检测HepG2细胞内的ROS水平,4 mmo1/L H_2O_2处理HepG2细胞1h使HepG2细胞内的活性氧(ROS)水平显著升高(与空白对照组相比,p0.05),而不同浓度的KJ-I能有效抑制氧化损伤细胞的ROS水平(与模型组相比,p0.05)。不同浓度的KJ-I处理转染ARE报告基因的HepG2细胞6h,HepG2细胞的ARE的活性随着KJ-I的浓度增加而呈上升趋势;同时经定量real time PCR检测,KJ-I可使HepG2细胞中含ARE序列的调控基因GCLC、GCLM和HMOX-1的mRNA表达水平上调(与空白对照组相比,p0.05),并呈浓度依赖性。结论栽培菊苣提取物KJ-I能有抑制H_2O_2诱导的HepG2细胞损伤,作用机制与其降低由ROS诱导的氧化应激水平相关。同时,KJ-I激活HepG2细胞内ARE及其相关调控基因的活性反映了KJ-I在细胞水平的抗氧化活性,也提示了KJ-I防止肝细胞氧化应激损伤的作用机制可能与Nrf2-ARE通路相关。

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