栽培菊苣提取物KJ-I对肝细胞的保护作用及其抗氧化机制的初步研究

【摘要】：目的考察栽培菊苣提取物(KJ-I)对H_2O_2致HepG2细胞氧化应激损伤的保护作用,并初步探索KJ-I在HepG2细胞中抗氧化作用的机制。方法经H_2O_2处理HepG2细胞建立肝细胞氧化应激损伤模型,通过MTT法和DCFH-DA荧光染色,考察KJ-I对受损细胞的保护作用。并通过检测KJ-I对抗氧化反应元件(ARE)报告基因转染稳定的HepG2细胞的ARE-Luciferase活性和含有ARE序列相关基因的mRNA表达水平,探索KJ-I对肝细胞的抗氧化防御体系的作用机制。结果经MTT法检测,4 mmol/L H_2O_2处理HepG2细胞3h后细胞存活率下降(58.88±1.62%),而12.5、25、50和100mg/L的KJ-I处理受损细胞的存活率皆显著上升(其存活率分别是61.27±1.39%、62.77±2.01%、66.29±1.78%和70.12±1.46%;其中,25mg/L的KJ-I治疗组与模型组相比,p0.05;50和100mg/L的KJ-I治疗组与模型组相比,p0.01;n=6)。经DCFH-DA荧光染色检测HepG2细胞内的ROS水平,4 mmo1/L H_2O_2处理HepG2细胞1h使HepG2细胞内的活性氧(ROS)水平显著升高(与空白对照组相比,p0.05),而不同浓度的KJ-I能有效抑制氧化损伤细胞的ROS水平(与模型组相比,p0.05)。不同浓度的KJ-I处理转染ARE报告基因的HepG2细胞6h,HepG2细胞的ARE的活性随着KJ-I的浓度增加而呈上升趋势;同时经定量real time PCR检测,KJ-I可使HepG2细胞中含ARE序列的调控基因GCLC、GCLM和HMOX-1的mRNA表达水平上调(与空白对照组相比,p0.05),并呈浓度依赖性。结论栽培菊苣提取物KJ-I能有抑制H_2O_2诱导的HepG2细胞损伤,作用机制与其降低由ROS诱导的氧化应激水平相关。同时,KJ-I激活HepG2细胞内ARE及其相关调控基因的活性反映了KJ-I在细胞水平的抗氧化活性,也提示了KJ-I防止肝细胞氧化应激损伤的作用机制可能与Nrf2-ARE通路相关。

【作者单位】：中国医学科学院/北京协和医学院新药安全评价研究中心 中国医学科学院/北京协和医学院药物研究所中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室
【基金】：“重大新药创制”科技重大专项课题(2008ZX09305-001)
【分类号】：R285