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《第五届全国中医药免疫学术研讨会——暨环境·免疫与肿瘤防治综合交叉会议论文汇编》2009年
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应用蛋白芯片研究PSP调节PBMC分泌细胞因子及信号转导机制

鲍依稀  李雯雯  赖思含  徐灿  卢芳  
【摘要】:目的:在本课题组前期工作基础上,采用细胞因子抗体芯片检测云芝糖肽(PSP)对健康成人外周血单个核细胞(PBMC)分泌细胞因子的影响,并从基因水平和蛋白水平研究Toll-like蛋白受体信号转导途径中的关键基因,如:含TIR接头蛋白分子(TIR-containing adaptor molecule,TRIF),TRIF相关接头蛋白分子(TRIF-related adaptor molecule,TRAM),肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF-receptor associated factor,TRAF6),髓样细胞分化因子88(Myeloid different factory 88,MyD88),MyDS8接头蛋白样蛋白(MyD88 adaptor-like protein,MAL)等的表达水平,以及关键节点蛋白TRAF6,MyD88蛋白表达水平,从而探索PSP的免疫调节机制,进一步验证和探讨PSP免疫信号转导途径。方法:抽取健康成人外周血10mL,肝素抗凝,无菌条件下,Ficoll液常规方法分离PBMC,计数及活力测定,调整细胞浓度为2×10~6/mL,定量接种于两个细胞培养瓶内,分为PSP组和对照组。PSP组加入终浓度为25μg/mL的PSP药液及终浓度为100μg/mL的植物血凝素(PHA),对照组只加终浓度为100μg/mL的PHA。37℃,5%CO2条件下培养。应用细胞因子抗体芯片检测PSP作用于PBMC后分泌细胞因子的变化。采用RT-PCR、Western blot等方法进一步检测PSP对免疫信号转导途径中重要基因以及关键节点蛋白表达水平的影响。结果:在芯片所包含的23种细胞因子中,PSP组PBMC与对照组相比上调1.3倍的因子有5个:GCSF,GM-CSF,IL-1α,IL-6,IFN-γ:有所降低是:IL-2,IL-3,IL-5;对其他细胞因子的表达没有显著影响。Toll-like受体信号转导途径中TRAM、TRAF6基因表达水平显著增高(P0.05),TRIF基因表达水平有所增高,MAL、MyD88基因表达水平有所降低,差别没有统计学意义(P0.05)。TRAF6蛋白表达水平显著增高(P0.05),MyD88蛋白表达水平有所降低,差别没有统计学意义(P0.05)。结论:PSP可以调节免疫细胞的细胞因子分泌;MyD88依赖和TRIF依赖两条通路在PSP免疫信号转导中均发挥作用,其中以TRIF依赖途径为主,表明Toll-like蛋白受体途径可能是PSP免疫调节的重要信号转导通路之一。
【作者单位】:重庆医科大学附属第二医院检验科
【分类号】:R392.1

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