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《中国科学技术协会第十届年会21分会场论文汇编》2008年
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金属硫蛋白MT-Ⅰ/Ⅱ缺失对小鼠大脑皮层神经元生长发育的影响

于小倩  彭双清  方厚华  
【摘要】:目的:金属硫蛋白(metallothionein,MT)是一类低分子量富含半胱氨酸,能与铜、锌等金属相结合的金属结合蛋白,它参与金属离子Cu~(2+)、Zn~(2+)稳态的维持,调节锌金属蛋白的生物合成和活性,抗自由基损伤和参与调节谷氨酸能等神经元的活动。目前,脑特异性MT-Ⅲ的神经生长抑制作用日益得到关注,而MT-Ⅰ/Ⅱ对于神经生长发育的影响研究较少。有研究显示MT-Ⅰ/Ⅱ在中枢神经系统和神经变性疾病中起重要作用。为此,我们采用C57BL/6野生型小鼠和MT-Ⅰ/Ⅱ基因敲除小鼠皮层神经细胞原代培养,研究内源性MT-Ⅰ/Ⅱ缺失对神经元生长发育的影响。方法:取新生24 h内的C57BL/6野生型小鼠(MT+/+)和MT-Ⅰ/Ⅱ基因敲除小鼠(MT-/-)大脑皮层进行神经细胞原代培养,不同时间点进行细胞固定和苏木素伊红(H.E.)染色,Olympus显微照相系统拍照,采用Image-pro Plus图像分析系统定量分析生长不同时间(第2、4、24、48和72h)的MT+/+和MT-/-组有突起的神经细胞比率(已长出突起细胞占总细胞的比率)、神经细胞突起长度、平均突起数(已长出突起细胞的平均突起数目)以及不同生长天数(第1、4、7和10d)的神经细胞的胞体大小。检测两种细胞的存活率、LDH漏出率、NO含量、MDA含量。结果:MT-Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠皮层神经细胞与野生型小鼠相比,在接种24h后突起细胞的平均突起数目低于野生型(P0.01),接种48h后突起长度低于野生型(P0.01),而MT-Ⅰ/Ⅱ的缺失对于突起的神经细胞的比率没有显著影响。皮层神经细胞培养4d后,MT-Ⅰ/Ⅱ敲除小鼠神经元的胞体平均面积小于野生型(P0.01)。同时MT-Ⅰ/Ⅱ的缺失导致MT-/-组皮层神经细胞的LDH漏出率、NO含量、MDA含量分别较MT+/+组高出53.9%、32.02%、12.32%,神经细胞存活率较MT+/+组低18.71%。结论:MT-Ⅰ/Ⅱ缺失对皮层神经细胞的生长发育有影响,主要体现在突起长度、平均突起个数,以及胞体大小。体外培养过程中MT-Ⅰ/Ⅱ的缺失使皮层神经细胞存在一定的氧化损伤

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