收藏本站
《中国水产学会鱼病专业委员会2013年学术研讨会论文摘要汇编》2013年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

卵形鲳鲹β-defensin基因的克隆及原核表达

王世锋  刘巧红  谢珍玉  郭伟良  蔡岩  周永灿  
【摘要】:Defensin是一类广谱抗菌阳离子小肽的总称,可快速、非特异性地杀灭入侵的病原体,同时对螺旋体、分歧杆菌及原生动物也有一定的杀灭作用。本文通过同源基因克隆和RACE技术,首次获得卵形鲳鲹defensin的cDNA全长序列。该基因序列全长为592bp,其开放阅读框长为192bp,编码63个氨基酸,含有一个20个氨基酸的信号肽及含6个半胱氨酸残基、3对二硫键的成熟肽,推测蛋白质分子质量7.217kD,理论等电点为8.88。BLAST检索表明,该基因所编码的多肽与多种鱼类来源的β-defensin抗菌肽的同源性很高,推测其是鱼类β-defensin抗菌肽家族的一个成员。荧光定量PCR结果表明,β-defensin基因在各个组织中均有表达,其中在肠道、头肾、后肾等免疫相关器官中的表达量最高,在鱼类非特异性免疫应答中发挥重要作用。同时,利用插入酶切位点的引物扩增不含信号肽的该基因cDNA编码序列,将扩增得到的目的基因和PET-32a质粒经BamhⅠ和SalⅠ双酶切后连接构成重组质粒,转化入BL2-1表达菌株,利用IPTG诱导表达。通过利用SDS-PAGE分析,对表达条件进行了优化,结果表明,在16℃条件下,利用0.1 mM IPTG诱导16h后其表达效率最高。表达产物分子量与预测值相符,重组融合蛋白主要以可溶性形式在上清中高效表达,利用Ni-Agarose His标签蛋白亲和柱进行纯化,可得到较高纯度的融合蛋白。研究结果为深入研究β-defensin蛋白活性及其非特异性免疫机制奠定基础,同时对开发利用海水鱼类抗菌肽、研发新型渔药或饲料免疫添加剂提供参考。

【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴兴泉,陈士华,吴祖建,林奇英,谢联辉;马铃薯X病毒CP基因的原核表达及特异性抗血清的制备[J];郑州工程学院学报;2003年02期
2 王亚玲,胡国富,李群,胡宝忠,何祖华;水稻抗病调控因子OsSGT1原核表达载体构建和表达蛋白纯化[J];东北农业大学学报;2004年03期
3 颜新敏,孙怀昌,于可响,于峰;人表皮生长因子cDNA的克隆、原核表达和抗体的制备[J];扬州大学学报(农业与生命科学版);2004年02期
4 金天明,高丰,邓旭明,喻华英,周学章;巴氏杆菌磺胺耐药基因SulⅡ的克隆及其表达[J];中国兽医学报;2004年06期
5 陈振海,王琴,范学政,宁宜宝,王在时,沈青春,夏春;猪瘟病毒E0蛋白的原核表达及其间接ELISA方法的建立[J];中国病毒学;2005年02期
6 贾洪林,仇华吉,李娜,朱庆虎,罗玉子,童光志;猪瘟E~(rns)基因在大肠杆菌中的高效表达[J];中国预防兽医学报;2005年03期
7 朱常香,宋云枝,王玫玫,王秀芳,温孚江;烟草环斑病毒外壳蛋白基因的原核表达及抗血清的制备[J];中国病毒学;2005年04期
8 丁炜东;曹丽萍;吴婷婷;;奥利亚罗非鱼促性腺激素释放激素前体蛋白的克隆与表达[J];生物技术;2005年06期
9 边传周;乔宏兴;;IBDV H1株VP2基因的原核表达及其产物的复性[J];中国兽医科学;2006年05期
10 杨学山;胡永浩;逯忠新;;猪胸膜肺炎放线杆菌外膜脂蛋白基因的原核表达[J];甘肃农业大学学报;2007年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 徐海涛;何启盖;马立保;;Study on the recombinant expression of β-defensin-2 and in vitro antibacterial experiment[A];第六次全国饲料营养学术研讨会论文集[C];2010年
2 辛英豪;高继明;刘标;李莎莎;姜世金;;Ⅰ型鸭病毒性肝炎VP1基因的克隆与原核表达[A];山东畜牧兽医学会禽病学专业委员会第一次学术研讨会论文集[C];2009年
3 焦石;贾立军;薛书江;刘明明;黄国明;张守发;;牛源犬新孢子虫MAG1基因的克隆及原核表达[A];中国畜牧兽医学会家畜寄生虫学分会第六次代表大会暨第十一次学术研讨会论文集[C];2011年
4 彭跃跃;丁燏;简纪常;鲁义善;;南极衣藻γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(GSHI)基因的克隆,原核表达及定量分析[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
5 岳亮;王艺磊;张子平;林鹏;邹志华;谢芳靖;陈锦民;冯建军;;日本囊对虾Cathepsin B基因的克隆与原核表达[A];中国甲壳动物学会第十一届年会暨学术研讨会论文摘要集[C];2011年
6 孟先明;潘艳;蔡新斌;陆专灵;梁湘;唐海波;杨剑;张红普;罗廷荣;;狂犬病毒ERA株基质蛋白的原核表达、纯化及多克隆抗体的制备[A];2010全国狂犬病防控高层论坛论文集[C];2010年
7 赵刚;李刚;范晓娟;;狂犬病病毒P基因的原核表达及间接ELISA方法的应用[A];中国畜牧兽医学会兽医公共卫生学分会第二次学术研讨会论文集[C];2010年
8 李凯;高宏雷;祁小乐;高玉龙;高立;邓小芸;王笑梅;;禽网状内皮组织增生病病毒env基因的原核表达及其多克隆抗体制备[A];全球肉鸡产业论坛暨第二届中国白羽肉鸡产业发展大会会刊[C];2010年
9 宋艳;柳学广;朱晓苏;徐丽;司马杨虎;徐世清;;野桑蚕Bmand-Sxl基因的克隆及原核表达[A];中国蚕学会第六届青年学术研讨会论文集(1)[C];2009年
10 袁媛;周新;;HBG1和TFRC基因的克隆与原核表达[A];中华医学会第八次全国检验医学学术会议暨中华医学会检验分会成立30周年庆典大会资料汇编[C];2009年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 吴一福;我学者首次发现抗HBV末端蛋白杂交瘤细胞系[N];中国医药报;2006年
2 宋冬 何玉玺;祖国的需要,就是我们最好的选择[N];科技日报;2009年
3 张晓鹏 何秀丽;哈兽研构建起“猪蓝耳病”预防控制平台[N];中国畜牧兽医报;2008年
4 记者 张颖 伊洁;农林大学学生喜获“挑战杯”特等奖[N];福建日报;2005年
5 本报记者 伊洁 张颖;“挑战杯”的胜利者[N];福建日报;2005年
6 俞忠良;我国克隆出SARS病毒样颗粒[N];健康报;2003年
7 张国民;还大家一个明白[N];中国医药报;2003年
8 本报首席记者 任荃;一石三鸟“里葆多”[N];文汇报;2009年
9 记者 陆威;9250万尾鱼虾蟹苗种投放北部湾[N];北海日报;2010年
10 张力为;“鱼-贝-虾三级循环养殖系统”获专家好评[N];中国渔业报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈立志;牛源致病性坏死梭杆菌分离鉴定及其白细胞毒素免疫特性研究[D];吉林大学;2008年
2 赵宇军;猪戊型肝炎病毒结构蛋白基因表达及其基因特异性噬菌体展示肽库构建[D];中国农业科学院;2005年
3 韩俊友;牛蛙皮肤抗菌肽分离纯化、基因克隆表达及生物学特性的研究[D];吉林大学;2007年
4 李静;海洋酵母菌Metschnikowia reukaufii W6b酸性蛋白酶的生产、基因克隆和表达的研究[D];中国海洋大学;2008年
5 游向荣;龙眼成花转变与成花逆转的差异蛋白质组学研究[D];福建农林大学;2009年
6 许波;抗菌/抗内毒素多肽葛佬素的表达、纯化及其生物活性的初步研究[D];第四军医大学;2004年
7 孙照刚;传染性喉气管炎病毒糖蛋白G基因的克隆、表达、蛋白功能研究以及缺失该基因病毒的重组[D];中国农业大学;2005年
8 郑银英;苹果茎沟病毒和褪绿叶斑病毒分子变异研究[D];华中农业大学;2005年
9 姜秀云;牛分枝杆菌主要保护性抗原基因的克隆、表达及免疫研究[D];吉林农业大学;2005年
10 黄小波;猪传染性胃肠炎检测基因芯片与猪传染性胃肠炎病毒SC-H株N基因表达研究[D];四川农业大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈雄艳;人IL-24基因的克隆、表达及活性鉴定[D];苏州大学;2004年
2 赵艳丽;水稻中DNA甲基转移酶的原核表达及功能初步鉴定[D];东北师范大学;2010年
3 丁彪;小鼠IFRG15基因在植入前胚胎及原核表达的研究[D];安徽农业大学;2010年
4 牟静;多头带绦虫四川株六钩蚴Tm45W基因的克隆与原核表达[D];四川农业大学;2010年
5 刘志强;抗Cyclin D1人源胞内单链抗体的原核表达与鉴定[D];吉林大学;2011年
6 王轶;甘蓝型油菜“蜀杂九号”防御素基因全长cDNA的克隆与原核表达[D];四川大学;2005年
7 张淑华;心肌型脂肪酸结合蛋白的原核表达与应用研究[D];吉林大学;2006年
8 王云珑;拟南芥Athspr突变体的耐热性分析及Athspr基因的原核表达[D];兰州大学;2010年
9 李会娟;家蚕转胶蛋白基因的原核表达及功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
10 欧阳锦凤;人博卡病毒结构蛋白VP1u,非结构蛋白ORFx和NP1的原核表达与抗体制备[D];华中师范大学;2011年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026