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《湖北省暨武汉市免疫学会第八届学术会议论文集》2003年
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熊果酸对白血病K562细胞作用的实验研究

谢珞琨  邓涛  胡志芳  陈会敏  谭锦泉  张秋萍  
【摘要】:目的:熊果酸(Ursolic acid,UA)为三萜酸类化合物,广泛存在丁食品,草药以及其他植物中,具有广泛的生物学活性。既往研究报道熊果酸有护肝、抗菌抗炎、降血脂抗动脉粥样硬化、免疫调节、促进造血系统功能恢复以及抗肿瘤等功能。近年来,其对肿瘤的抑制杀伤效果越来越受到重视。研究发现某些肿瘤的发生和进展都能在不同程度上受到熊果酸的抑制,而最引人注意的是其抗肿瘤进展的效用,在日本用以治疗肿瘤的熊果酸已获专利并商品化。研究证明,熊果酸对肺癌细胞A-549、白血病细胞P-388和L-1210均具有细胞毒性作用,但其作用机制一直未明确。本实验主要探讨熊果酸在体外对白血病K562细胞株的增殖抑制作用和杀伤机制。方法:采用MTT法检测熊果酸对K562细胞的增殖抑制效应,流式细胞术分析熊果酸作用下K562细胞的细胞周期分布,用彗星电泳分析熊果酸对K562细胞DNA的损伤,hoechst33258荧光染色观察K562细胞DNA片段化,采用细胞免疫化学染色检测K562细胞内Bcl-2的表达,Western blotting检测K562细胞内caspase-3和磷酸化酪氨酸的表达和活性。结果研究发现,熊果酸在浓度超过30 μmol/L时对K562细胞具有增殖抑制和杀伤效应;并呈浓度和时间依赖性。在熊果酸作用下K562细胞出现G2/M抑制,并且DNA受损亦呈一定的浓度和时间依赖性;荧光染色显示细胞核体积变小、皱缩,可见致密强荧光,染色体DNA呈浓染的团块状、颗粒状分布,并出现凋亡小体;细胞免疫化学染色显示细胞内Bcl-2表达下降,Western blotting检测caspase-3出现活化后的17KD剪切片段,210KD处磷酸化酪氨酸的表达下降。结论:熊果酸在体外对K562细胞有中等强度的抑制和杀伤作用,从40μmol/L起,UA对K562细胞开始具有较明显的作用。熊果酸可能主要作用于处于G2/M期的细胞,其效应机制之一为抑制Bcl-2的表达以降低细胞对凋亡的抵抗性,同时抑制K562细胞BCR/ABL融合蛋白的激酶活性,导致K562细胞的增殖受抑,并通过某种途径触发凋亡信号通路,诱导caspase-3的活化,最终导致细胞DNA的降解,细胞凋亡。

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