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《全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集》2008年
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日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因的克隆、表达及各虫期转录和表达情况的研究

孔娟  冯正  徐斌  邓王平  鞠川  胡薇  
【摘要】:目的克隆和表达日本血吸虫腺嘌呤磷酸核糖转移酶基因1(SjAPRT1),并研究该基因在各虫期转录和蛋白表达情况。方法根据文献报道的SjAPRT1序列(GenBank Accesion:AAW24796)设计引物,RT-PCR扩增目的基因,分析其在日本血吸虫各虫期转录本差异。将目的基因亚克隆至载体pET28a,转化至大肠埃希菌BL21菌株,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导表达。纯化的蛋白免疫小鼠和家兔,Western blotting分析其免疫反应性及在各虫期蛋白表达差异。结果 RT-PCR扩增结果显示在虫卵、尾蚴、童虫和成虫均检测到SjAPRT1基因转录本(561bp),SjAPRT1基因亚克隆入pET28a并得到表达。Western blotting分析结果表明纯化的重组蛋白SjAPRT1可被日本血吸虫感染兔血清识别,各虫期中只有成虫蛋白可被SjAPRT1多抗兔血清识别,在Mr25 000处有特异性条带出现。结论日本血吸虫SjAPRT1基因在体外获得表达,并在日本血吸虫虫卵、尾蚴、童虫和成虫中均发现SjAPRT1基因转录本,但只在日本血吸虫成虫中检测到目的蛋白。其表达蛋白具有一定的抗原性,它有可能成为日本血吸虫疫苗的候选抗原和具有良好的免疫诊断价值。

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