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《全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集》2006年
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结核杆菌ESAT-6基因在毕赤酵母中表达及其鉴定

傅小强  吴少庭  黄汉菊  刘洪波  
【摘要】:目的构建能在毕赤酵母表达系统中表达结核杆菌ESAT-6蛋白的重组质粒,并对其表达产物进行基本生物学特性鉴定。方法用PCR方法从结核分枝杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因片段,克隆至PGEM-T easy载体,PCR筛选阳性克隆并测序,用限制性内切酶消化后,目的片段亚克隆至表达载体pPICZaA,构建pPICZaA-esat-6重组质粒,线性化后用化学转化方法整合到GS115染色体中,PCR鉴定目的基因的整合,Zeocin抗性筛选多拷贝重组子并诱导表达,表达产物用Western-blot鉴定其表达。结果从结核杆菌H37Rv基因组中扩增出ESAT-6基因片段,成功构建重组表达质粒pPICZaA-ESAT-6,SDS-PAGE显示胞外并无表达,酵母细胞经裂解后ESAT-6基因翻译的蛋白加上载体的信号肽序列和c-myc表位一共18KDa左右在胶上相应位置有表达,并且能被结核病人血清所识别。结论利用毕赤酵母表达系统获得胞内表达的结核杆菌ESAT-6重组蛋白,为结核病诊断抗原和疫苗研究奠定了基础。
【作者单位】:华中科技大学同济医学院 深圳市疾病预防控制中心
【分类号】:R346

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