收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定

武婕  陈秋霞  邹丽容  李晖  周杰  莫艳玲  柯昌文  
【摘要】:目的从人源化噬菌体抗体库(Human Single Fold scFv Libraries I+J)中筛选到能高亲和性、特异结合人禽流感病毒H5N1的单链抗体,为建立H5N1快速筛查试剂和人源化治疗单抗奠定基础。方法以H5N1病毒的血凝素(Hemagglutitin,HA)蛋白和核蛋白(Nucleoprotein,NP)为目的蛋白,对上述单抗噬菌体文库以亲和性为原理进行筛选,经过三轮筛选富集后,随机挑选了96个噬菌体克隆扩增培养,ELISA法挑选能特异性、高亲和性结合目的蛋白的噬菌体克隆,并换用HB2151宿主菌对阳性单链抗体克隆进行可溶性表达,ELISA法鉴定可溶性单链抗体的结合活性,PCR扩增阳性克隆的轻、重链基因片段,并对阳性单链抗体分子测序和序列分析。结果经过三轮筛选,分别从96个噬菌体克隆中挑选到了两株能特异结合NP蛋白、三株能特异结合HA蛋白的单链抗体,PCR扩增都得到了长为300bp、302bp和935bp的轻链、重链和轻链-连接片段-重链的基因片段,测序结果分析发现上述五条单链抗体片段在轻链的47、49、50、51、53、54、56、96、97、98和99位的氨基酸组成不同,而特异结合NP蛋白的单链在重链区域氨基酸组成完全相同,而特异结合HA蛋白的单链在重链的44、47、85、86、87、88和89位氨基酸组成不同。结论从噬菌体抗体库中筛选到的特异结合HA和NP蛋白的单链抗体片段,可为进一步研发H5N1快速筛选试剂和人源性治疗抗体奠定基础,也可为鉴定HA和NP蛋白中的抗原决定簇提供结构信息。

知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 李富祥,罗家琴;单链抗体的生物学特性及其在肿瘤和艾滋病诊断治疗中的应用[J];现代免疫学;2004年03期
2 武国军,王禾,王栋,于磊,郝晓柯,白玉杰,王智,袁建林;多价抗人精浆蛋白/抗人CD_3双特异性单链抗体的构建及表达[J];中华泌尿外科杂志;2004年08期
3 孙春燕;;从噬菌体单链抗体库中筛选MMP7单链抗体[J];黑龙江医药科学;2008年03期
4 赵小玲,荫俊;人源抗狂犬病毒单链抗体基因原核表达质粒的构建及高效表达[J];生物技术通讯;2004年02期
5 高宁;单链重组抗体的表达及其临床应用[J];免疫学杂志;1998年01期
6 刘友生;王长松;陈燕平;;运用生物信息学技术分析预测抗氨基末端脂多糖结合蛋白(NH-LBP)单链抗体的结构[J];药物生物技术;2006年06期
7 刘俊霞,孟磊,许静,贾海蓉,宋增璇;引导选择抗细胞表面分子单链抗体[J];中国医学科学院学报;2004年04期
8 宋林霞,俞炜源;抗结肠癌相关抗原单链抗体基因的构建和表达[J];生物工程学报;2000年01期
9 洪美亚;曾冬云;龚兴国;;胞内抗体及其研究进展[J];细胞生物学杂志;2006年03期
10 周春水,江敏,徐琳娜,甄永苏;抗肿瘤侵袭与转移单链抗体scFv-M97基因构建、克隆及在大肠杆菌中的可溶性表达[J];中国肿瘤生物治疗杂志;1997年03期
11 陈萍,邓健蓓,韩骅,药立波,苏成芝;抗人肿瘤坏死因子-α单链抗体与其配体的相互作用[J];中国生物化学与分子生物学报;2000年04期
12 刘顺爱,浅野龙太郎,王学,熊谷泉,工藤俊雄,徐道振;人源抗HBsAgscFv与重组复合干扰素融合蛋白的高效表达及活性鉴定[J];中国免疫学杂志;2004年09期
13 刘兵;王美莲;王斯;史俊岩;郑兰艳;牟玲;罗恩杰;;人源抗汉坦病毒核衣壳蛋白T7噬菌体抗体库的构建[J];微生物学杂志;2007年02期
14 李承新,刘玉峰,王刚,李春英,万业宏,李巍;人源性抗角蛋白单链抗体的构建及表达[J];中华皮肤科杂志;2003年04期
15 朱慧芬,杨道锋,沈关心,周春;抗转铁蛋白受体单链抗体原核表达载体的构建和表达[J];华中科技大学学报(医学版);2004年04期
16 黄君健,黄翠芬,俞炜源;特异性鼠抗人交联纤维蛋白ScFv基因的克隆、表达及ScFv-Scu-PA-32K融合蛋白的构建[J];军事医学科学院院刊;1996年04期
17 刘兵;史俊岩;王舰;王美莲;王斯;郑兰艳;牟玲;罗恩杰;;抗汉坦病毒NP scFv基因表达及生物活性分析[J];微生物学杂志;2009年02期
18 孙静,吕安国,吴文芳,白向阳,任秀宝,刘虹;超抗原SEA与抗黑色素瘤ScFv融合基因的构建及表达[J];生物工程学报;2003年06期
19 张平,蔡美英,赵宗蓉,魏大鹏,黎光,毕建虹;抗人AFP单链抗体基因的构建和在大肠杆菌中的表达[J];四川大学学报(医学版);2005年01期
20 王慧,荫俊;抗A型肉毒毒素人源单链抗体的表达、纯化及结合活性分析[J];军事医学科学院院刊;2004年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 武婕;陈秋霞;邹丽容;李晖;周杰;莫艳玲;柯昌文;;特异结合人禽流感病毒H5N1的scFv分子性能鉴定[A];2010广东省预防医学会学术年会资料汇编[C];2010年
2 高士争;张玉静;刘松财;郝军元;;抗猪脂肪细胞特异膜蛋白scFv噬菌体抗体库的构建及可溶性表达[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
3 高士争;张玉静;刘松财;郝军元;;抗猪脂肪细胞特异膜蛋白scFv与人IgG1Fc片段在毕赤酵母中的融合表达[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
4 张玉静;高士争;刘松财;郝军元;;抗猪脂肪细胞特异膜蛋白scFv基因地克隆及序列分析[A];动物生理生化学分会第八次学术会议暨全国反刍动物营养生理生化第三次学术研讨会论文摘要汇编[C];2004年
5 高士争;李卫真;张曦;尹革芬;段刚;;抗脂肪细胞特异膜蛋白scFv噬菌体抗体库的构建及可溶性表达[A];中国生物化学与分子生物学会农业生物化学与分子生物学分会第六次学术交流会论文集[C];2004年
6 刘叔文;李润明;张瑞涛;朱志博;郑伯建;;CL-385319作用于H5型血凝素蛋白抑制H5N1禽流感病毒的感染[A];第十届全国抗炎免疫药理学学术会议论文集[C];2010年
7 刘顺爱;浅野龙太郎;熊谷泉;工藤俊雄;徐道振;;人源抗HBsAg scFv与重组复合干扰素融合蛋白的制备及研究[A];中国免疫学会第四届学术大会会议议程及论文摘要集[C];2002年
8 张国良;沈丽;陈心春;曾贞;刘成海;聂广;周伯平;;基于假病毒技术的抗H5N1禽流感病毒中药筛选平台的建立及评价[A];全国第3届中西医结合传染病学术会议暨中国中西医结合学会传染病专业委员会第2届委员会议论文汇编[C];2010年
9 张富强;张文东;宋建领;齐绣花;赵焕云;吕粤;岳亮;张应国;范泉水;;云南边境禽流感病原监测及H5N1亚型病毒进化分析[A];中国畜牧兽医学会禽病学分会第十五次学术研讨会论文集[C];2010年
10 戚宇华;崔仑标;史智扬;葛以跃;李显;单军;陆祖宏;;H5N1禽流感病毒样颗粒的制备与应用[A];第十一次中国生物物理学术大会暨第九届全国会员代表大会摘要集[C];2009年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 杜海莲;禽流感病毒(H5N1)基因(h5n1a)在马铃薯中的转化与表达研究——附:乙肝表面抗原(HBsAg)基因转化的对比研究[D];福建农林大学;2000年
2 杨涛;利用噬菌体表面展示技术制备抗人肿瘤坏死因子α单链抗体及其人源化改造[D];山西医科大学;2004年
3 安广宇;抗血小板膜糖蛋白基因工程抗体的制备和性质研究[D];苏州大学;2001年
4 张鲲;可溶性单链抗体的GST活性研究及含有硒代半胱氨酸的单链抗体在大肠杆菌中的表达[D];吉林大学;2004年
5 刘兵;人源抗汉坦病毒核衣壳蛋白单链抗体研究[D];中国医科大学;2007年
6 李峥;高致病性禽流感H5N1病毒血凝素蛋白中和抗原表位鉴定及其跨物种传播规律的研究[D];北京协和医学院;2009年
7 王荣智;抗副溶血弧菌TLH单链抗体的淘选与功能研究[D];福建农林大学;2012年
8 鞠湘武;H5N1型禽流感病毒损伤细胞溶酶体的机制研究和南极极端环境下科考队员的应激反应研究[D];北京协和医学院;2012年
9 解志刚;基因工程抗HER2/neu ×抗CD16双特异性抗体的构建、表达及其功能的初步研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
10 杨树洪;抗牛精子膜蛋白单链抗体基因的克隆与表达[D];中国农业大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 闫洁;HLA-A2/CD35scFv融合蛋白在昆虫杆状病毒载体系统中的表达与纯化[D];华中科技大学;2009年
2 孙涛;抗NI-35重组单链抗体表达载体的构建与融合表达[D];中国医科大学;2004年
3 岳建华;抗人红细胞抗原A和Rh(D)噬菌体抗体库的构建及鉴定[D];南京师范大学;2006年
4 于扬;具有谷胱甘肽过氧化物酶活性的人源含硒单链抗体Se-scFv-2D8催化位点的研究[D];吉林大学;2010年
5 闫洁;HLA-A2/CD35scFv融合蛋白在昆虫杆状病毒载体系统中的表达与纯化[D];华中科技大学;2009年
6 孙美玲;SLC-anti CEA ScFv双功能抗体融合蛋白的构建与表达[D];西北农林科技大学;2004年
7 陈磊;人抗狂犬病毒小分子抗体ScFv-Fc在毕赤酵母中的表达与鉴定[D];吉林大学;2007年
8 王立强;H5N1流感病毒样颗粒疫苗的研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2011年
9 纪卿;噬菌体展示技术筛选幽门螺旋杆菌单链抗体的研究[D];江南大学;2008年
10 李旭勇;H5N1亚型高致病性禽流感病毒对哺乳动物模型小鼠的致病力研究[D];中国农业科学院;2011年
中国重要报纸全文数据库 前2条
1 记者 何德功;日本确认岛根县禽流感病毒为H5N1型[N];新华每日电讯;2010年
2 王小龙;高致病性H5N1病毒变种或具人际传播能力[N];科技日报;2010年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978