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《中国园艺学会南瓜分会西南地区南瓜产业化发展研讨会暨第三届会员代表大会论文集》2009年
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正交设计法优化印度南瓜SRAP反应体系

刘泽发  孙小武  罗伏青  严钦平  
【摘要】:利用L4~5正交设计对影响南瓜SRAP反应体系的MgCl_2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度5个因素进行了筛选,快速得到稳定性和重复性好的南瓜SRAP扩增体系。另外对复性温度、PCR循环次数等影响南瓜SRAP扩增结果的重要因素进行了优化。最终优化的南瓜SRAP反应体系为25μL反应液中:10×buffer2.5μL,0.2 mmol/L dNTPs,引物0.2μmol/L,1.5mmol/L MgCl_2,DNA模板6ng/pL,Taq酶1.5U。本研究最终确立的PCR反应程序为:94℃预变性5 min,然后按94℃变性40 s,35℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行5个循,94℃变性40 s,50℃退火40 s,72℃延伸90 s,进行32个循环,最后72℃延伸5 min。在此条件下得到的SRAP标记可为印度南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供稳定有效的手段。
【作者单位】:湖南省瓜类研究所 湖南农业大学园艺园林学院
【分类号】:S642.1

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