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《中国园艺学会十字花科蔬菜分会第六届学术研讨会暨新品种展示会论文集》 2008年
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转Bt基因青花菜的抗虫性研究

李汉霞  张晓辉  张余洋  王涛涛  叶志彪  
【摘要】:以青花菜绿彗星下胚轴为外植体,通过农杆菌介导的遗传转化方法将苏云金芽孢杆菌晶体毒蛋白基因CryIAc和CryIC分别导入青花菜栽培品种中。结果表明:CryIAc和CryIC基因分别转化青花菜,各获得35株卡那霉素抗性植株。分别以CryIAc和CryIC特异引物对转基因植株进行PCR扩增,结果得出27株CryIAc阳性植株和13株CryIC阳性植株。以目的基因CryIAc和CryIC为探针,进行Southern blot分析,证明多数植株目的基因已经整合到青花菜基因组中。对含有单拷贝目的基因植株自交纯合后通过有性杂交获得带有CryIAc和CryIC双价的转基因青花菜。利用RT-PCR检测Bt基因在转基因植株中的表达情况,发现不同株系间在RNA水平上存在显著的表达差异,部分株系中双价Bt同时得到表达。ELISA检测转基因植株Bt毒蛋白含量为0.12~0.82μg g~(-1)FW。结合室内和田间饲虫试验,证明抗虫效果与Bt毒蛋白表达水平正相关。通过多世代选择,获得高抗菜粉蝶和小菜蛾的纯合转基因青花菜材料。现已获批进行转基因安全的中间试验。

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