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《南瓜营养、保健功能与产业发展研讨会论文集》 2004年
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南瓜RAPD分析体系的优化

周辉  赵福宽  林成  高遐虹  程继鸿  
【摘要】:为确保南瓜RAPD反应结果的稳定性和重复性,本文对MgCl2浓度、dNTPs浓度、Taq酶含量、引物浓度、模板DNA浓度、复性温度、PCR循环次数等影响南瓜RAPD结果的重要因素进行了初步研究。最终优化的南瓜RAPD反应体系为25μl反应液中:10×反应buffer(100mmol/L Tris-HCL,100 mmol/L KCL,80 mmol/L(NH4)2SO4,pH9.0,NP-40)2.5μl,3mmol/L MgCl2,0.2 mmol/L dNTPs,Taq酶1.0U,引物15 ng/μl,DNA模板10 ng/μl。本研究最终确立的PCR反应程序为:94℃预变性5min,然后按94℃变性30s,37℃退火30s,72℃延伸90s,进行40个循环,最后72℃延伸5min。在此条件下得到的RAPD图谱可为南瓜遗传多样性、分子标记及辅助育种等研究提供有效的手段。

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