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《第六届全国生物医学体视学学术会议暨第九届全军军事病理学学术会议、第五届全军定量病理学学术会议论文汇编》2005年
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重组真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A的构建及真皮干细胞的转染

闫国和  粟永萍  王军平  艾国平  王锋超  郑怀恩  程天民  
【摘要】:目的克隆血小板衍生生长因子A 链(Platelet-derived growth factor A chain,PDGF-A)基因,以增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)载体pEGFP-N1为骨架,携带PDGF-A基因进入真皮间充质干细胞(dermis-drived mesenchymal stem cells,DMSCs),为采用转入PDGF-A 基因的DMSCs 修复创面奠定基础。方法采用RT-PCR 二步分离法,以人肝癌细胞系(SMC-7721)的总RNA 为模板,扩增PDGF-A 基因的全长cDNA 编码序列,克隆入载体pMDl8-T,随后又将PDGF-A 基因亚克隆入pEGFP-N1载体中,构建PDGF-A 基因的真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A,并采用Fugene 6介导转染技术将PDGF-A 基因导入DMSCs。结果克隆到PDGF-A 基因的全长cDNA 序列,经测序验证,其序列与GenBank 所报告的该基因的序列完全一致。成功构建了PDGF-A 链基因的真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A,并实现了PDGF-A 基因在DMSCs 的瞬时表达。结论成功地将PDGF-A 基因克隆到pEGFP-N1载体中,并实现了PDGF-A 基因在DMSCs 的表达。

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