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《2005国际暨第八届全国头颈肿瘤大会论文集》 2005年
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腺样囊性癌肿瘤干细胞的分离与鉴定

温玉明  刘坤  华成舸  潘剑  高庆红  王昌美  
【摘要】:目的:本研究拟对腺样囊性癌不同表型的肿瘤细胞生物学特性进行分析和研究,试图为肿瘤干细胞学说提供实验依据,探讨干细胞在肿瘤发生发展中的意义。方法:本研究(1)采用单细胞体外培养的方法了解腺样囊性癌肿瘤细胞(ACC-2)的分裂、增殖特点,以探讨肿瘤干细胞存在的可能性。(2)采用免疫组化的方法检测ACC-2肿瘤细胞表面cd44和cd24表达的差异性。(3)采用免疫磁珠技术分离不同表型的Ace-2肿瘤细胞。(4)采用单细胞体外培养和裸鼠体内成瘤试验的方法了解不同表型的ACC-2肿瘤细胞分裂、增殖和成瘤特点。(5)采用基因芯片技术,了解不同表型的肿瘤细胞的基因差异。结果:(1)在体外培养中,ACC-2单细胞仅有4.4%可以分裂、增殖,而并非全部都发生分裂。(2)不同表型的ACC-2体外单细胞培养实验发现,A 组肿瘤细胞发生分裂的比例为8.4%,B 组肿瘤细胞发生分裂的比例为14.7%,C 组、D 组细胞未发生分裂。(3)五组肿瘤细胞均接种1×10~6后2周,接种A 组、B 组、E 组肿瘤细胞的裸鼠腋部皮下可形成移植瘤,而接种C 组、D 组肿瘤细胞的裸鼠腋下未成瘤;五组肿瘤细胞均接种1×10~5后3周,A 组、B组、E 组裸鼠腋下可成瘤,而C 组、D 组裸鼠腋下未成瘤;五组肿瘤细胞均接种1×10~4后4周,A 组、B 组裸鼠腋下可成瘤,c 组、D 组、E 组裸鼠腋下未成瘤;五组肿瘤细胞均接种1×10~3后8周,仅B 组裸鼠腋下可成瘤;五组肿瘤细胞均接种1×10~2后10周,均未成瘤。(4)免疫组化实验证实,B 组肿瘤细胞具有分化成其它表型肿瘤细胞的能力。(5)经基因芯片检测B 组与E 组肿瘤细胞一共有502个与细胞分化、粘连、凋亡、细胞运动、细胞信号传导、细胞代谢有关的基因存在差异。结论:本实验首次获得了ACC-2细胞株中存在肿瘤干细胞的证据。ACC-2细胞的增殖和成瘤能力可能和这部分细胞关系密切。细胞表面抗原为cd44~+ cd24~-的肿瘤细胞较未分离的ACC-2肿瘤细胞具有更强的增殖能力;cd44~+ cd24~-肿瘤细胞具有分化为其它表型肿瘤细胞的能力。未分离的ACC-2肿瘤细胞与cd44~+ cd24~- ACC-2肿瘤细胞在与细胞分化、凋亡、粘连、信号传导等有关的基因上存在差异。ACC-2肿瘤细胞的增殖能力可能源于cd44~+ ACC-2与cd44~+ cd24~- ACC-2肿瘤细胞的增殖能力。本实验分离出的表面抗原为cd44~+ cd24~- 的ACC-2肿瘤细胞较ACC-2肿瘤细胞含有更高比例的肿瘤干细胞。cd44和cd24是ACC-2肿瘤干细胞表面标志之一。

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