林麝MHC-DRB第二外显子多态性分析

【摘要】：麝Moschus spp.是重要的经济动物,国家一级重点保护动物。中国是麝资源最丰富的国家,占世界总量的70%以上,但由于过度猎杀,野生麝资源已临枯竭。自1958年以来,麝的人工养殖已取得了一定的成效,但养殖依然存在许多严重的问题,尤其是疾病问题,比如化脓性疾病,其发病率高、治愈率低、死亡率高,使得林麝养殖规模难以扩大。主要组织相容性复合体(MHC)是一个高度多态性的基因类群。按照其产物结构、表达方式、组织分布与功能,可分为I类、II类和III类基因。其中II类基因包括近30个基因座位,经典的II类基因一般指DR、DP、DQ,其中DR亚区包括一个DRA基因及5个DRB基因。MHC的多态性已经被广泛认为是动物在长期进化过程中与病原体和近交避免机制相互作用的结果,是高等动物对于不利环境因素的一种适应性表现。研究圈养林麝MHC,可以了解其与适应能力相关的遗传背景,为圈养林麝制定科学合理的遗传管理措施。本研究选取四川马尔康养麝场林麝8只,金凤山养麝场11只,米亚罗养麝场29只,共48只林麝作为研究对象,以牛DRB引物LA31-LA32扩增林麝DRB基因。48个个体中获得了18个等位基因,其中4个个体有3~4个等位基因。序列对比,发现氨基酸的突变位点主要是位于抗原结合位点(PBR),其非同义突变(dN)与同义突变(dS)的比值大于1,说明林麝和其他偶蹄目动物一样在抗原结合位点的基因所经历的是正选择。在抗原识别结合位点(ABS)dN也远远大于dS,说明这些位点受到的选择压力也比较大,因为这些位点编码的蛋白与抗原识别有关,个体MHC的多态性高,才能识别更多的外源寄生虫,个体才具有更高的免疫能力。结果显示,林麝的MHC的DRB多态性较低,这和使用中性分子标记-微卫星对圈养林麝多样性的分析结果不同(微卫星分析结果显示圈养林麝多样性较高),这可能是因为中性分子标记在进化过程中受到较小选择压力。基于DRB外显子序列用NJ(邻接法)构建了部分偶蹄目动物的系统发生树,在NJ树上,林麝的DRB基因与其他鹿科动物DRB呈镶嵌式分布,提示林麝DRB多样性可能是由于跨种进化。林麝DRB外显子的序列分为三个亚群,三个亚群在取样的三个居群中都有分布,可能因为三个养麝场的遗传奠基者来源于相似的地理种群。