《经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会（第三卷）》2010年

实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒

【摘要】：对虾白斑病由白斑综合征病毒(WSSV)感染引起,所有养殖对虾对该病高度易感,蟹类、小龙虾、淡水虾以及各种龙虾也易感,但发病率和死亡率有很大差别。多种虾类常表现为持续感染或终身隐性感染。盐度剧烈变化等环境胁迫可能诱发该病爆发流行。隐性感染虾体内的病毒含量极低,现有方法难以检测。建立一种快速、灵敏、准确的检测方法对预防该传染病的发生和流行具有重要的意义。本文应用TaqMan探针技术设计了探针和引物,建立了检测WSSV的实时荧光定量PCR方法。对影响PCR反应的主要因素Mg2+浓度和退火温度等进行了优化,证明当Mg2+浓度为3.5～4.0mmol,退火温度为59～60℃时可获得最佳的扩增和检测效果。

【作者单位】：厦门出入境检验检疫局福建农林大学
【基金】：国家质量监督检验检疫总局项目(2004IK028)资助
【分类号】：S945

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前5条

1	徐丽美,王玮,杨丰;对虾白斑杆状病毒(WSBV)定量PCR检测技术研究[J];高技术通讯;2001年01期
2	孔杰,石拓,刘萍,韩玲玲,徐怀恕,相建海;中国对虾一种C型杆状病毒随机扩增多态性DNA分析[J];海洋与湖沼;1997年04期
3	;Detection of prawn white spot baculovirusby polymerase chain reaction[J];Acta Oceanologica Sinica;1999年04期
4	石正丽,黄灿华,陈棣华,Ｊ．Ｒ．Ｂｏｎａｍｉ,Ｓ．Ｄｕｒａｎｄ;中国对虾杆状病毒基因克隆及探针制备与检测[J];中国病毒学;1998年03期
5	庞耀珊,谢芝勋,谢志勤,廖敏,邓显文,刘加波,唐小飞,何竞铭,梁海明;二温式PCR检测对虾白斑综合征病毒[J];中国兽医杂志;2003年04期

	【共引文献】
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前10条

1	赵晴;;对虾白斑综合症病毒综述[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年09期
2	黄灿华,石正丽,张建红,张吕平,吴雄飞,J.R.Bonami,陈棣华,吴清江;原位杂交研究对虾白斑杆状病毒在虾体内感染过程[J];病毒学报;2000年03期
3	谢芝勋,庞耀珊,邓显文,唐小飞,刘加波;多重RT-PCR同时检测鉴别三种对虾病毒的研究与应用[J];病毒学报;2005年05期
4	王吉桥,徐锟;对虾的主要疾病及其诊断方法[J];水产科学;2002年05期
5	王年斌,韩家波,周遵春,马志强,邓欢,宛立,薛克;虾池水环境因子与虾病爆发的相关性分析[J];水产科学;2004年12期
6	程伟,刘志昕;对虾白斑综合症病毒的分子生物学研究进展[J];水产科学;2005年05期
7	岳春梅;袁新华;董在杰;缪为民;;应用 PCR 检测太湖青虾白斑病毒和桃拉病毒[J];淡水渔业;2005年06期
8	荆晓艳;黄倢;张士璀;;核酸检测技术在水产动物病毒感染诊断中的应用[J];动物医学进展;2008年09期
9	任聪;龚艳清;陈信忠;徐淑菲;王寿昆;;双重PCR同时检测对虾白斑综合征病毒(WSSV)和传染性皮下及造血器官坏死病毒(IHHNV)[J];福建水产;2008年04期
10	徐丽美,杨丰;利用定量PCR方法研究对虾白斑杆状病毒感染与发病的关系[J];高技术通讯;2001年12期

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前2条

1	谢芝勋;庞耀珊;刘加波;邓显文;唐小飞;;多重RT-PCR同时检测鉴别TSV、WSSV和IHHNV的研究[A];中国海洋学会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
2	陈晓汉;曾地刚;彭敏;雷爱莹;李咏梅;蒋伟明;;一步二温式RT-PCR检测南美白对虾桃拉综合症病毒[A];广西水产研究所论文集（2001—2005）[C];2006年

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1	赖晓芳;中国对虾应答WSSV侵染相关基因的研究[D];中国海洋大学;2010年
2	刘问;白斑综合征病毒对锯缘青蟹的致病性及致病机理研究[D];宁波大学;2010年
3	郭银汉;福州地区对虾病毒病的病原诊断及流行病学[D];福建农林大学;2000年
4	朱建中;对虾白斑综合征病毒在螯虾的增殖与动态分布及其基因组片段的测序、克隆与表达[D];南京农业大学;2000年
5	管越强;主要环境因子对养殖对虾抗病力及白斑综合症发生的影响[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2003年
6	许雅香;对虾白斑综合征病毒囊膜蛋白基因克隆、表达及表达产物抗病效果的研究[D];浙江大学;2003年
7	罗田;对虾抗病相关基因的克隆、表达及其功能研究[D];厦门大学;2003年
8	兰永胜;对虾白斑杆状病毒全基因组转录图谱分析及功能基因研究[D];厦门大学;2003年
9	章跃陵;南美白对虾类Ig的定性、功能和免疫分子进化的研究[D];厦门大学;2003年
10	李嵚;白斑综合症病毒致病相关早期蛋白的鉴定及基因组同源重复区的功能研究[D];沈阳药科大学;2003年

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前10条

1	迟妍妍;抗WSSV-VP37结合蛋白单克隆抗体的研制及其初步应用[D];中国海洋大学;2011年
2	王专伟;斑节对虾家系生长、抗病、抗逆性状与免疫酶活性的相关分析[D];上海海洋大学;2011年
3	孟璐;白斑综合征病毒（WSSV）重复单元ORF94的序列差异分析及囊膜蛋白的相互作用[D];南京农业大学;2011年
4	高慧敏;江苏地区白斑综合征分子流行病学调查[D];南京农业大学;2011年
5	柏玲;脊尾白虾感染白斑综合症病毒在江苏的流行病学调查及防控对策[D];南京农业大学;2011年
6	李才文;主要环境因子对对虾感染白斑综合症的影响研究[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2002年
7	潘登;活性分子在甲醇毕赤酵母pichia pastoris中的表达及特异性DNA蛋白结合因子的纯化及鉴定[D];厦门大学;2002年
8	李钫;1、Nudel/NudE的功能及其磷酸化调节的研究　2、WSBV在螯虾血淋巴原代细胞系统中感染、增殖情况的初步研究[D];中国科学院研究生院（上海生命科学研究院）;2003年
9	马文强;对虾白斑综合征病毒ORF220基因在昆虫细胞内的表达和分布[D];中国科学院研究生院（武汉病毒研究所）;2004年
10	艾海新;栉孔扇贝急性病毒性坏死症病毒基因克隆及核酸诊断技术的建立[D];中国海洋大学;2004年

	【二级参考文献】
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前3条

1	黄倢,杨丛海,于佳,宋晓玲;T-E染色法用于对虾暴发性流行病的现场快速诊断[J];海洋科学;1995年01期
2	涂小林，钟江，高双诚，王颖，乐云仙，朱学宝;中国对虾一种杆状病毒的ELISA检测方法[J];水产学报;1995年04期
3	黄灿华,张建红,高玮,石正丽;应用光镜和电镜对病虾组织细胞病理变化的观察与分析[J];中国病毒学;1997年04期

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1	沈怀舜,陆勤勤,丁亚平,陈国耀,施福生,许璞;南美白对虾白斑综合症病毒检测及其分析[J];水产养殖;2003年04期
2	葛晨霞;李月红;张培军;吴东明;付云红;;致病性嗜水气单胞菌气溶素基因PCR检测方法的建立[J];安徽农业科学;2010年34期
3	吕玲,何建国,谢数涛,杨晓明,邓敏;白斑综合症杆状病毒(WSBV)PCR检测方法的改进及应用[J];热带海洋;2000年02期
4	廖思明,阎冰,陈剑锋,兰国宝,文雪;对虾白斑病毒PCR反应体系的改进[J];广西科学;2004年02期
5	杨壮志;李定霏;王远微;;应用PCR快速诊断黄鳝嗜水气单胞菌败血症[J];水产养殖;2008年02期
6	曹庭盛;李孝军;蔡渭明;杜爱芳;;简单异尖线虫PCR检测方法的建立[J];中国预防兽医学报;2009年04期
7	王馗,史成银,黄倢;用于PCR检测对虾皮下及造血组织坏死杆状病毒(HHNBV)的一种快速提取DNA方法[J];海洋水产研究;2000年01期
8	林端;董燕红;袁茵;易斌;陈新华;吴玲玲;;鱼类虹彩病毒PCR快速检测试剂盒的准确度评价及其应用[J];海洋环境科学;2007年02期
9	段宏安;张睿;徐晔;周毅;姚燕林;王海涛;李金华;刘小琴;吴玉石;;锦鲤疱疹病毒的PCR鉴定[J];畜牧与兽医;2008年11期
10	隋正红,张学成;龙须菜藻红蛋白亚基基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达[J];高技术通讯;2001年07期

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前10条

1	陈信忠;任聪;龚艳清;王寿昆;;实时荧光定量PCR法检测对虾白斑综合征病毒[A];经济发展方式转变与自主创新——第十二届中国科学技术协会年会（第三卷）[C];2010年
2	王伟利;张艳;孟庆峰;钱爱东;肖成蕊;宋战昀;;锦鲤疱疹病毒3段基因PCR检测方法的建立及应用[A];动物检疫学分会2010年学术年会论文集[C];2010年
3	谢国驷;黄倢;;迟缓爱德华氏菌荧光定量PCR检测方法的建立和应用[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
4	孟庆峰;吕文雪;单晓峰;钱爱东;王伟利;;锦鲤疱疹病毒TaqMan荧光定量PCR快速检测方法的建立及应用[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
5	王斌;赵凤梅;王惠;胡亮;;迟钝爱德华氏菌Ⅲ型分泌系统基因克隆及多重PCR检测方法建立[A];渔业科技创新与发展方式转变——2011年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
6	郭倩倩;陶妍;谢晶;;南美白对虾中四种病原菌的多重PCR检测[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
7	马冬梅;白俊杰;邓国成;李胜杰;叶星;江小燕;;大口黑鲈溃疡综合症病毒MCP基因序列分析及PCR快速检测方法的建立[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
8	谢丽基;谢芝勋;庞耀珊;刘加波;邓显文;谢志勤;;贝类奥尔森派琴虫PCR检测方法的建立及初步应用[A];中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第七届全国会员代表大会暨第十三次学术研讨会论文集（下册）[C];2009年
9	吴明皇;常藕琴;石存斌;吴淑勤;;鳜鱼TCRα基因实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年
10	翁思聪;朱军莉;励建荣;;水产品中四种致病菌多重PCR检测方法的建立及评价[A];2010年中国水产学会学术年会论文摘要集[C];2011年

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1	李贵阳;两株鳗弧菌全基因组序列测定及转录组比较分析[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2011年
2	梁廷明;中华绒螯蟹螺原体重要功能基因的筛选和研究及螺原体与WSSV的多重PCR检测技术[D];南京师范大学;2011年
3	李莉;草鱼补体C9和穿孔素基因的克隆与表达研究[D];华中农业大学;2008年
4	陈红莲;狗鱼幼鱼弹状病毒的特性、基因组测序及分子生物学检测技术研究[D];华中农业大学;2009年
5	陈德芳;斑点叉尾鮰海豚链球菌病病原学、病理学和诊断方法研究[D];四川农业大学;2011年
6	高原;鳜凋亡相关基因的克隆与功能研究[D];中国科学院研究生院（水生生物研究所）;2006年
7	母昌考;中华绒螯蟹（Eriocheir Sinensis）Peroxiredoxin 6和Thioredoxin 1基因的克隆及表达[D];中国科学院研究生院（海洋研究所）;2009年
8	鲁军;螺旋藻活性肽的纯化、鉴定及降压、护肝机制研究[D];北京林业大学;2010年
9	李可俊;几种水生动物肠道细菌的分子生态学分析[D];上海交通大学;2007年
10	符贵红;草鱼细胞色素P4503A和孕烷X受体基因表达分析及其功能初步研究[D];上海海洋大学;2011年

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1	许遐;牡蛎包拉米虫检测及鉴定体系的研究[D];内蒙古农业大学;2010年
2	王伟龙;宠物乌龟沙门氏菌PCR检测方法的建立[D];福建农林大学;2010年
3	刘鸿玲;对虾传染性肌肉坏死病毒PCR检测方法建立及样品检测[D];鲁东大学;2012年
4	鲁雪;鳗弧菌6个毒力基因的多重PCR与基因芯片检测技术的建立以及创新检测技术的初步探索[D];中国海洋大学;2010年
5	兰建新;养殖大菱鲆病原菌迟缓爱德华氏菌的分离鉴定及快速检测技术的建立[D];中国海洋大学;2008年
6	刘智超;养殖大菱鲆4种致病菌多重PCR和荧光定量PCR检测方法的建立[D];中国海洋大学;2012年
7	邵惠;条斑紫菜（Pyropia/Porphyra yezoensis）实时荧光定量PCR内参基因的筛选[D];中国海洋大学;2012年
8	姜荧安;荧光定量PCR检测哈维氏弧菌活的非可培养状态过程中的基因表达[D];中国海洋大学;2010年
9	付希;无乳链球菌cpsE基因的克隆、原核表达和多克隆抗体制备及其在原位PCR中的应用[D];四川农业大学;2012年
10	孔铖将;香鱼补体系统成分C9基因的克隆与表达研究[D];宁波大学;2012年

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