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哈维氏弧菌GYC1108-1胞外蛋白酶的制备及免疫原性研究

郝贵杰  沈锦玉  潘晓艺  尹文林  曹铮  
【摘要】:胞外蛋白酶(ECPase)是哈维氏弧菌GYC1108-1胞外产物的主要致病因子,经鉴定其为半胱胺酸蛋白酶,分子量约55KD,能够分解脱脂奶中的酪蛋白,命名为1108-ECPase。本实验建立了胞外蛋白酶活性平板法检测1108-ECPase和YZ-ECPase的相对酶活(YZ为能够分泌目的蛋白酶的重组菌),并利用这个方法确定了细菌分泌ECPase达最高峰的培养时间为36h,粗提ECPase最适的饱和硫酸铵浓度为70%。GYC1108-1和YZ培养上清经硫酸铵盐析,SephadexG-25凝胶过柱后,得到较为纯化的1108-ECPase和YZ-ECPase。选择白油、蜂胶和弗氏三种不同佐剂与适量抗原混匀,分别免疫3只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。三次免疫后制备小鼠血清,间接ELISA测定抗体效价,除空白对照外,其它8组小鼠的免疫血清效价达1:1.6×104~1:2.56×105,免疫组的效价从高到低依次为弗氏白油蜂胶不加佐剂,不同佐剂的免疫效果依次为:弗氏白油蜂胶。免疫印迹实验结果表明:小鼠血清在55KD处有明显的反应条带。以上结果表明,ECP具有很好的免疫原性,这为下一步研究基因工程疫苗奠定了基础。

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