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中国猪链球菌2型强致病菌株基因组表达文库的构建及在细菌体内诱导表达基因筛选中的初步运用

宋洁  黎庶  丛延广  饶贤才  汪正清  胡晓梅  周莹冰  陈炜  陈志瑾  熊坤  胡福泉  
【摘要】:目的构建中国猪链球菌2型强致病菌株(05ZYH33)的基因组表达文库,并在利用体内诱导抗原技术筛选和鉴定05ZYH33菌株体内诱导基因中进行初步应用与评价。方法提取05ZYH33菌基因组DNA,采用限制性内切酶Sau3AⅠ对进行部分酶切,获取大小为0.5-3 kb的DNA酶切片段,插入经BamHⅠ酶切消化的pET-30 a/b/c表达载体系统,转化大肠埃希菌BL21(DE3)菌株,构建05ZYH33菌株基因组表达文库。将收集到的8个05ZYH33强毒株感染患者的恢复期血清等体积混合,经05ZYH33强毒株和大肠埃希菌BL21(DE3)全细胞吸附及细菌超声裂解物吸附处理后,对用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导后的文库进行免疫印迹筛选,寻找05ZYH33强毒株的体内诱导表达基因。结果05ZYH33强毒株的基因组文库构建共得到3.2×10~4个重组子,远大于理论计算的0.58×10~4,随机挑选重组子经XhoⅠ和KpnⅠ双酶切鉴定,重组阳性率达95%,05ZYH33强毒株基因组表达文库构建成功。运用经多次吸附处理的05ZYH33强毒株感染患者恢复期血清对构建的05ZYH33基因组文库进行体内诱导基因的初步筛选,从2000个阳性克隆中共筛到5个阳性克隆,测序鉴定和生物信息学分析显示5个克隆子中包含05ZYH33强毒株基因组的7个开放阅读框(ORF)。结论本实验成功构建了中国猪链球菌2型05ZYH33强致病株的基因组表达文库,成功建立了体内诱导抗原筛选技术操作平台,为利用05ZYH33强致病株基因组文库进行其体内诱导基因的进一步系统筛选奠定了基础。

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