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《2007年学术年会论文集》2007年
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红曲霉谷氨酸脱羧酶的性质研究

徐冬云  江仲文  
【摘要】:确定了快速测定红曲霉谷氨酸脱羧酶(GAD)酶活的测定方法—比色法.得到 GAD 酶活的适宜反应底物体系为:0.1mol/L 的柠檬酸缓冲液,pH5.0,内含50mmol/L 底物 L-谷氨酸钠(L-MSG)、0.1mmol/L5’-磷酸毗哆醛(PLP);测定方法为:200μL 底物溶液和100μL 酶液于37℃水浴中反应一定时间(根据活力大小反应0.5~20h 不等),在冰浴中加入200μL、0.2mol/L、pH9.0的硼酸盐缦冲液终止反应,再加入1.0mL 新鲜配制的6%苯酚和 400μL 次氯酸钠溶液并充分振荡,置于沸水浴中反应10min。迅速在冰浴中冷却5min.于630nm 下测定吸光值.通过细胞破碎、(NH4)_2SO_4盐析和 Sepharose CL-6B 凝胶柱层析,对红曲霉 GAD 进行了有效的分离和纯化,纯化后酶活提高了6.56倍。采用 SDS-PAGE 初步断定出红曲霉 GAD 的蛋白分子量在67KD 左右.红曲霉 GAD 酶液最适反应温度为 30℃.在 pH 4.4~4.8范围内酶活较高.红曲霉培养到第6天时 GAD 活性达到最高。

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【参考文献】
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【共引文献】
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