收藏本站
《第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集》2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

骨髓间充质干细胞维持原代猪肝细胞形态与功能的实验研究

顾劲扬  张悦  施晓雷  诸薛慧  丁义涛  
【摘要】:目的:探索猪肝细胞与骨髓间充质干细胞体外最适共培养体系,为生物人工肝的构建提供理想细胞来源。方法:自中华实验猪(n=3)髂前上棘抽取骨髓,采用密度梯度离心法分离单个核细胞,贴壁传代培养至第3代,流式细胞仪分别鉴定 CD29、CD44、CD45 和 CD90比例。原位两步胶原酶法分离猪肝细胞,台盼兰拒染实验判断肝细胞活率,抗白蛋白、CK18免疫细胞化学染色鉴定肝细胞纯度。将肝细胞与骨髓间充质干细胞(MSCs)按照不同比例随机混合培养,观察各组肝细胞形态和功能变化。结果:第3代 MSCs 纯度95%, 新鲜分离的肝细胞活率95%,纯度99%。共培养组肝细胞迅速粘附于 MSCs 表面,并呈球形聚集生长;电镜发现共培养组异质细胞问出现细胞连接,超微结构与正常肝细胞接近;共聚焦显微镜示异质细胞间呈三维分层生长;细胞活力染色观察见共培养组死细胞明显较对照组减少。肝细胞/MSCs 2:1组白蛋白分泌水平和尿素合成能力自第1天培养起均显著高于其余各组(P0.05),并在第2天达到高峰,随后缓慢下降;实验组肝细胞内白蛋白免疫细胞化学染色较对照组增高;肝细胞糖原染色亦明显强于对照组。经流式细胞仪分选2:1共培养组肝细胞,Western Blotting 检测提示肝细胞内白蛋白和 CYP3Al 合成均较其余共培养组显著增高(P0.05)。细胞周期检测示共培养组肝细胞 G2-S 期细胞明显增加(P0.05)。结论:MSCs 与原代猪肝细胞共培养可维持肝细胞形态与功能。2:1共培养组培养至第2天为最适共培养体系,可应用于生物人工肝的构建。

手机知网App
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 赵艳梅;钟国强;柯红红;李金轶;;体外不同诱导条件对大鼠骨髓间充质干细胞分化为心肌细胞的影响[J];基础医学与临床;2010年06期
2 刘晶;易敬林;杨海军;;人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为角膜缘干细胞的研究[J];江西医学院学报;2009年02期
3 郭俊芳;张赢予;莫亚宏;王好;周艳芳;张国辉;;骨髓间充质干细胞对体外损伤心肌细胞凋亡的影响[J];江苏大学学报(医学版);2009年03期
4 周军;杨惠林;岑建农;李振江;陈文明;陈子兴;;同种异体大鼠骨髓间充质干细胞共培养及多向分化潜能鉴定[J];苏州大学学报(医学版);2007年02期
5 王丽霞;陆化;刘澎;费小明;吴雨洁;汪承亚;李建勇;;骨髓间充质干细胞与K562细胞共培养对IL-8表达的影响[J];中国实验血液学杂志;2008年01期
6 徐远;俞兴;徐林;;骨髓间充质干细胞与髓核细胞的体外共培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年27期
7 张荣莉;姜尔烈;王玫;周征;翟文静;翟卫华;王华;王志永;包宇实;杜宏;韩明哲;;骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养诱导分化为心肌样细胞[J];中国实验血液学杂志;2008年05期
8 凌翔;陈胜喜;罗万俊;陈日;;体外“心肌样”环境下5-氮胞苷诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化[J];江西医药;2008年12期
9 李全修;陈伯华;刘勇;徐陵;;构建兔髓核细胞诱导人骨髓间充质干细胞向类髓核细胞分化的体外模型[J];中国组织工程研究与临床康复;2009年45期
10 冯月兰;徐国兴;谢茂松;;视网膜色素上皮细胞培养上清液联合视黄酸对骨髓间充质干细胞的诱导分化作用[J];海峡科学;2010年05期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 顾劲扬;张悦;施晓雷;诸薛慧;丁义涛;;骨髓间充质干细胞维持原代猪肝细胞形态与功能的实验研究[A];第一届全国疑难重型肝病大会、第四届全国人工肝及血液净化学术年会论文集[C];2008年
2 曾俊义;魏云峰;汪泱;谢安;娄远蕾;张梅;应国秋;徐信群;;间接接触共培养下骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及相关调控基因的时序表达[A];第一届全国中西医结合心血管病中青年医师论坛论文汇编[C];2008年
3 宋明宝;于学军;朱光旭;;双层共培养模型中内皮细胞对平滑肌细胞增殖能力的影响[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年
4 王春婷;杨浩;鞠躬;;嗅神经鞘细胞对神经突起体外生长的作用[A];中国神经科学学会第六届学术会议暨学会成立十周年庆祝大会论文摘要汇编[C];2005年
5 张岩;罗奋华;吴应积;;大鼠曲细精管生殖细胞共培养和精子发生过程的观察[A];第一届中华医学会生殖医学分会、中国动物学会生殖生物学分会联合年会论文汇编[C];2007年
6 郑学栋;徐国兴;;联合共培养系统诱导骨髓间充质干细胞分化为视网膜色素上皮细胞的研究[A];第十届全国中西医结合眼科学术会议暨第五届海峡眼科学术交流会论文汇编[C];2011年
7 刘昱;宋健;陈锡昌;胡成俊;刘维新;;体外“心肌环境”诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化的研究[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年
8 周军;杨惠林;岑建农;陈文明;陈子兴;;同种异体共培养大鼠骨髓间充质干细胞的神经分化诱导鉴定[A];第八届全国脊柱脊髓损伤学术会议论文汇编[C];2007年
9 宫立众;夏顺中;张翼军;张红宾;史曦凯;钟大平;裴莉;张勇;;骨髓间充质干细胞中大小两群细胞的生物学特性比较[A];第九届全国实验血液学会议论文摘要汇编[C];2003年
10 冯凯;陈健琳;乌仁娜;徐晨;李欲航;陈虎;;骨髓间充质干细胞抑制异体T细胞反应的实验研究[A];第三届全国血液免疫学学术大会论文集[C];2003年
中国重要报纸全文数据库 前3条
1 欣光;移植猪肝细胞首获成功[N];华夏时报;2002年
2 张中桥;西京医院建立人视网膜色素上皮细胞老化模型[N];中国医药报;2006年
3 冯丽玲;曾庆平;科学家获得转基因青蒿植株[N];中国医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李海生;低氧促进人骨髓间充质干细胞增殖和分化及其机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2005年
2 张伟;骨髓间充质干细胞免疫调节机制的研究[D];中国协和医科大学;2004年
3 牟大鹏;抑制消减杂交技术筛选骨髓间充质干细胞诱导分化前后差异表达基因[D];吉林大学;2007年
4 景红;大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导为肾脏系膜细胞样细胞的实验研究[D];中国协和医科大学;2008年
5 黄定强;骨髓间充质干细胞定向诱导分化的实验研究[D];四川大学;2004年
6 王勃;诱导骨髓干细胞向心肌样细胞分化的研究[D];中国医科大学;2005年
7 韩立赤;张应力诱导大鼠骨髓间充质干细胞骨向分化的实验研究[D];四川大学;2005年
8 周竹娟;转核技术建立可增殖神经细胞系的实验研究[D];第三军医大学;2007年
9 邓全军;端粒酶永生化大鼠骨髓间充质干细胞的体内外研究[D];天津医科大学;2008年
10 邢小丽;大鼠视网膜匀浆上清液体外诱导骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞实验研究[D];天津医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 刘晶;人骨髓间充质干细胞体外诱导分化为角膜缘干细胞的研究[D];南昌大学;2009年
2 周健;HaCaT细胞诱导MSCs向表皮干细胞分化机制的研究[D];中南大学;2009年
3 曾俊义;间接接触共培养下骨髓间充质干细胞分化为心肌样细胞及相关调控基因的时序表达[D];南昌大学;2008年
4 刘宏志;大鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经前体细胞的研究[D];中国医科大学;2005年
5 董玉泉;兔骨髓间充质干细胞的分离、培养、鉴定及生物学特性研究[D];青岛大学;2006年
6 项正兵;人骨髓间充质干细胞向胆碱能神经元样细胞定向分化的实验研究[D];南昌大学;2007年
7 周雅丽;Survivin基因在骨髓间充质干细胞中的表达研究[D];兰州大学;2009年
8 王佳南;仿生电刺激在离体心肌细胞诱导大鼠骨髓间充质干细胞向心肌样细胞分化中的作用[D];重庆医科大学;2009年
9 林晓斌;鼠骨髓间充质干细胞体外诱导分化肝干细胞的研究[D];汕头大学;2005年
10 李立;绿荧光蛋白转基因小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化成内皮细胞的研究[D];第三军医大学;2005年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026